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烟曲霉分泌蛋白质提取方法的比较
目的 比较3种丝状真菌烟曲霉分泌蛋白质的提取方法,并通过双向凝胶电泳对提取的蛋白质进行分离.方法 利用TCA沉淀、丙酮沉淀及TCA-丙酮沉淀法分别提取烟曲霉的分泌蛋白质,SDS-PAGE比较其结果,初步确定佳提取方法,并利用双向凝胶电泳分离提取的蛋白质.结果 TCA-丙酮沉淀法提取的蛋白质浓度高,种类和数量多,双向凝胶电泳显示蛋白质点聚合较好,无非特异的条带和杂质,背景透明.结论 TCA-丙酮沉淀法提取的烟曲霉分泌蛋白质图谱较好,为丝状真菌分泌蛋白质的研究奠定了基础.
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结肠炎相关结肠癌分泌蛋白质体外富集方法的建立
目的:建立小鼠结肠炎相关结肠癌分泌蛋白质体外富集的方法;方法:利用结肠炎相关结肠癌小鼠模型,取不同阶段实验小鼠的结肠体外培养48h,收集分泌蛋白质.使用SDS-PAGE分离分析分泌蛋白质,并通过Western blot检测分泌蛋白质是否存在胞浆蛋白或者核蛋白的污染.结果:在实验条件下收集得到的分泌蛋白重现性好,分泌蛋白中核蛋白和胞浆蛋白的污染较少,且能够明显分辨与病程相关差异表达蛋白质条带.结论:成功建立了结肠炎相关结肠癌分泌蛋白质的体外富集方法.
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分泌蛋白质组学在肿瘤标志物研究中的进展
肿瘤细胞代谢过程中能够分泌蛋白质,分泌蛋白质组学已成为肿瘤标志物筛选的重要手段.分泌蛋白在肿瘤的早期诊断、进展监测、寻找潜在的肿瘤药物靶点中发挥着重要作用.本文就分泌蛋白质组学相关技术及其在临床中的应用进展做一综述.
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SELDI-TOF-MS分析对结核分枝杆菌诊断价值的研究
目的 分析对比结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)分泌蛋白指纹图谱,寻找检测MTB的蛋白标志物.方法 经BACTEC 960仪培养出结核分枝杆菌标准菌株,提取分泌蛋白,应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)检测MTB蛋白表达,和NTM标准株、临床MTB及其他肺部炎症细菌蛋白指纹图谱进行对比分析.结果 分枝杆菌分泌蛋白共检出83个蛋白峰,3145、3895m/z在所有分枝杆菌均高表达,其他肺部炎症分离株未见表达.NTM与MTB标准株比较,有51个蛋白峰分泌蛋白存在差异,MTB有5个特征性蛋白峰(2930、3878、4103、4902、5804m/z).结论 分枝杆菌有其特征性分泌蛋白,有助于分枝杆菌快速鉴定.应用SEL-DI-TOF-MS技术对BACTEC 960阳性培养液的上清液蛋白组成进行分析,有助于MTB的快速鉴别.
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鼻咽癌转移相关的分泌蛋白质的筛选
目的:筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)转移相关的分泌蛋白质,为阐明NPC转移机制以及筛选NPC转移分子标志物提供实验依据.方法:应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)技术分离一对来自同一亲本,具有不同转移潜能的NPC细胞系5-8F和6-10B细胞的分泌蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾-四极杆-串联质谱(ESI-Q-TOFMS/MS)对差异表达的蛋白质点进行鉴定.western印迹法检测差异分泌蛋白质nm23-H1在两株细胞中的表达水平.结果:建立了5-8F和6-10B分泌蛋白质的2-DE图谱,质谱分析鉴定出14个非冗余的分泌蛋白质,其中Oncoprotein18等蛋白质在高转移潜能NPC细胞系5-8F中的表达水平高于无转移潜能的NPC细胞系,而nm23-H1等蛋白质在5-8F细胞系中的表达水平低于6-10B细胞系.westem印迹分析证实了nm23-H1在5-8F和6-10B细胞分泌蛋白质中的差异表达水平.结论:所鉴定的14个非冗余的差异分泌蛋白质为研究NPC转移机制以及筛选NPC转移分子标志物提供了实验依据.
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分泌蛋白质组学在肿瘤标志物研究中的现状及进展
"分泌蛋白"是指由活细胞分泌的一系列分子,另外也包括活细胞表面流出分子.分泌蛋白在细胞信号传导、通信和迁移中扮演重要的角色.随着肿瘤生物标记研究的进展,肿瘤细胞分泌蛋白的研究逐渐成为热点,可能成为肿瘤诊断和预后评估的工具,也可能成为药物治疗的靶点.近年来,随着蛋白组学技术的发展,极大促进了分泌蛋白组学的研究和发展.然而,分泌蛋白组学研究仍旧面临诸多困难.本文系统回顾了所发现的常见肿瘤细胞分泌蛋白及其分析方法.
