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PCR荧光探针法在检测分泌物沙眼衣原体、淋球菌及解脲支原体中的应用
目的 评价PCR荧光探针法用于检测分泌物沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)、淋球菌(Neisseriagonorrhoeae,NG)、解脲支原体(U℃aplasma urealyticum,UU)的适用性.方法 热裂解法提取CT、NG、UU分泌物样本中病原微生物DNA,以其作为模板,采用PCR荧光探针法检测样本中CT、NG、UU的阳性率.同时采用乳胶法检测相应样本中CT的阳性率,培养法检测相应样本中NG及UU的阳性率,并将检测结果分别与PCR荧光探针法进行比较.结果 1 209份CT标本中,PCR荧光探针法阳性检出率(9.76％)显著高于乳胶法(2.64％),1 491份NG标本中,PCR荧光探针法阳性检出率(6.64％)显著高于培养法(4.16％),差异均有统计学意义(P＜0.05);1 260份UU标本中,PCR荧光探针法阳性检出率(37.6％)略高于培养法法(36.8％),但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 与培养法和乳胶法比较,荧光探针PCR法对CT和NG的阳性检出率更高,而对UU的阳性检出率与培养法相近,适用于分泌物中CT、NG及UU的检测.
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3种检测肺炎支原体感染方法的比较分析
目的:比较3种检测方法对肺炎支原体(MP)感染的临床诊断效果及应用价值.方法:对疑为呼吸系统MP感染的494例住院患儿留取痰液,用PCR荧光探针法进行MP DNA检测,用被动凝集法和间接免疫荧光法进行血清抗MP抗体检测.结果:PCR荧光探针法阳性299例(60.53％),被动凝集法阳性290例(58.70％),间接免疫荧光法阳性242例(48.99％),PCR荧光探针法与被动凝集法的阳性率无差别(x2=0.341,P＞0.012 5),间接免疫荧光法与PCR荧光探针法(x2=13.274,P＜0.012 5)、被动凝集法(x2=9.383,P＜0.012 5)阳性率相比,差异均有统计学意义.被动凝集法阳性结果中滴度为40的患儿共77例,其中70例的另2种方法结果均为阳性.结论:间接免疫荧光法的检测阳性率低于PCR荧光探针法与被动凝集法.对于儿童,被动凝集法静脉血标本的采集较PCR荧光探针法的痰标本采集更为简便,可将被动凝集法作为MP感染的门诊筛查项目;被动凝集法应将滴度≥40的结果判定为阳性.
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人乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒与宫颈癌的关系
目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)和单纯疱疹病毒(HSV)等对宫颈癌的病因学作用.方法 应用聚合酶链反应(PCR)-核酸内切酶分型检测宫颈癌活检组织中HPV-DNA和HSV-DNA基因,以正常宫颈组织作对照.结果 在宫颈癌活检组织中HPV-16,18,35型和HSV-Ⅱ型阳性率分别为38.9%和36.2%,与正常妇女宫颈组织阳性率均为3.2%比较,差异均有非常显著意义(P＜0.001).结论 HPV-16,18型和HSV-Ⅱ型是诱发宫颈癌的重要病原因子.
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PCR-荧光探针法对手足口病不同样品病原学检出率比较
目的 了解不同样品对手足口病检出率的差异,为临床手足口病标本的采集提供科学依据.方法 利用PCR-荧光探针法对不同病人不同样品和同一病人不同样品进行检测,并对结果进行统计学分析.结果 以大便、肛门拭子和疱疹液的检出率高,而咽拭子、脑脊液、血清的检出率低.结论 应采集大便、肛门拭子和疱疹液,以提高手足口病的检出率.
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PCR荧光探针法在Y染色体微缺失检测中的应用
目的 比较无精子症因子(azoospermia factor,AZF) PCR荧光探针法与多重聚合酶链反应结合琼脂糖凝胶电泳检测法的结果吻合度.方法 收集2016年6月至2017年6月来我院就诊的208例男性不育患者外周血.根据WHO 2010年第5版精液分析操作指南将208例患者分为正常精子症组、无精子症组和少精子症组.用PCR荧光探针法对208例男性不育患者检测Y染色体无精子症因子,然后采用多重聚合酶链反应结合琼脂糖凝胶电泳检测208例不育患者Y染色体无精子症因子.结果 在208例不育男性患者中,正常精子症组有100例,无精子症组47例,少精子症组61例.PCR荧光探针法检测Y染色体无精子症因子,少精子症组1例AZFc区(SY254/SY255)缺失,无精子症组1例AZFabc区缺失,正常精子症组未发现基因缺失类型.多重聚合酶链反应结合琼脂糖凝胶电泳检测法结果与PCR荧光探针法检测结果一致. 结论 2种方法检测的患者无精子症因子基因的结果吻合度一致.与多重聚合酶链反应结合琼脂糖凝胶电泳检测法相比,PCR荧光探针法一次上样可以做48个样本,节省了时间与成本,结果自动保存,可以作为Y染色体微缺失检测的推荐方法.
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RNA恒温扩增法在肺炎支原体检测中的应用
目的 探讨RNA恒温扩增法检测肺炎支原体的可行性及其应用价值.方法 采集2016年5~7月在我院住院治疗的200例患急性呼吸道感染儿童咽拭子,分别用RNA恒温扩增法和PCR荧光探针法进行肺炎支原体检测,分别计算两种检测方法的检出率,根据公式计算灵敏度和特异性,并进行统计学分析.结果 RNA恒温扩增法检出肺炎支原体17例,检出率为8.5%,PCR荧光探针法检出肺炎支原体18例,检出率为9.0%,两种方法的检出率比较差异无统计学意义(P>0.05);RNA恒温扩增法与PCR荧光探针法相比灵敏度为88.9%、特异度为99.5%.结论 RNA恒温扩增法与PCR荧光探针法检出率相当,具有较高的灵敏度和特异度,可以作为一种新的方法用于肺炎支原体临床检测.
