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Pre-miR-10a重组腺病毒质粒的构建及其在K562细胞中的表达
目的 构建pre-miR-10a(miR-10a前体)重组腺病毒表达质粒,感染K562细胞,并检测其基因表达水平.方法 化学合成pre-miR-10a基因序列,克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,将构建正确的重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV pre-miR-10a与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183感受态细胞,经同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-pre-miR-10a,转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒,经4轮扩增后检测病毒滴度.收集病毒后,以100 MOI感染K562细胞,RT-PCR法检测miR-10a基因的转录水平.结果 重组腺病毒质粒pAd-pre-miR-10a经Pac Ⅰ酶切,证明带有目的基因的重组腺病毒穿梭质粒已整合到腺病毒基因组中,4轮扩增后腺病毒滴度为1.5×1011 pfu/ml,可高效感染K562细胞,感染效率达90％以上;重组腺病毒Ad-pre-miR-10a感染的K562细胞中miR-10a基因转录水平明显升高,过表达率为150.82％.结论 已成功构建重组腺病毒表达质粒pAd-pre-miR-10a,并可在K562细胞中高效表达,为进一步从体内和体外水平研究其抗白血病效应奠定了基础.
关键词： pre-miR-10a 腺病毒科 K562细胞 基因表达
