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重庆地区中蜂囊状幼虫病病毒型特异性遗传变异分析
目的 分析重庆地区中蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)的遗传多样性.方法 采用RT-PCR法从重庆地区中蜂囊状幼虫病病死幼虫体内扩增CSBV的2段结构蛋白和1段非结构蛋白的编码序列,并克隆至pMD18-T载体进行双向序列测定,所得序列在NCBI上进行BLAST搜索,以进行同源性分析；应用ClustalW2软件进行多序列比对分析；应用SNAP软件计算同义替换率(Synonymous substitution rate,dS)、非同义替换率(Nonsynonymous substitution rate,dN)及其比值(dS/dN);采用MEGA 4软件的邻接法(Neighbor-joining)中的大可能性算法(Maximum likelihood method)构建系统进化树.结果 CSBV重庆分离株片段SBl-2、SB6-7和SB14-15的序列同源性高于99.06％,序列保守,3个片段序列均只发现少数点变异碱基,属于亚洲型,与东方蜜蜂广州分离株和韩国分离株的亲缘关系近；CSBV重庆分离株存在特有的核苷酸和氨基酸位点,且与亚洲型分离株存在广泛的共有基序；亚洲型分离株的替换率高于欧洲型分离株.结论 CSBV分离株存在型特异的遗传变异规律.
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囊状幼虫病病毒的流行及其感染治疗
目的 调查重庆、浙江和云南蜜蜂幼虫囊状幼虫病病毒(sacbrood virus,SBV)的感染率,并观察抗微生物肽(amicrobial peptide)小分子阳离子六肽(short cationic hexapeptides,SP6)对人工感染的中蜂囊状幼虫病的治疗效果.方法 采用RT-PCR法检测重庆、浙江和云南蜜蜂幼虫SBV的感染率.将SP6溶于糖水,隔天饲喂1次SBV人工感染的发病中华蜜蜂蜂群,连续给药9次,测定蜂群幼虫死亡率,评价其对感染的防治效果.结果 重庆和浙江中蜂幼虫SBV感染率分别为85.6％和4.76％,云南西方蜜蜂幼虫SBV感染率为6.67％;重庆和浙江西方蜜蜂幼虫及云南中蜂幼虫未检出SBV.0.1％SP6给药组能极显著地降低SBV感染蜂群的幼虫死亡率,防治效果达到74.48％.结论 在重庆、浙江和云南地区均检出SBV,但SBV在不同地区对蜜蜂种群的危害程度不同,在重庆中蜂群广泛流行.SP6对SBV感染中蜂有良好的防治效果,具有药物开发价值.
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中蜂囊状幼虫病病毒结构蛋白的表达及其抗血清的制备
目的 原核表达中蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sarbood virus,CSBV)结构蛋白,并制备其抗血清.方法 采用RT-PCR法扩增CSBV结构蛋白基因片段,克隆至pGEX-4T-1载体中,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经Gluthathione-Sepharose 4B亲和层析纯化后,免疫小鼠,制备抗血清,并进行Western blot鉴定.结果 重组表达质粒经菌落PCR鉴定证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约52 000,以可溶性形式表达；纯化后纯度可达95％以上；制备的抗血清可识别天然CSBV结构蛋白.结论 成功在大肠杆菌中表达了CSBV结构蛋白,并制备了其抗血清,为进一步研究囊状幼虫病病毒与宿主的相互作用及开发血清学诊断方法奠定了基础.
