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绵羊骨髓细胞抗菌肽文献资料
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绵羊骨髓细胞抗菌肽基因的改造及其在原核生物中的表达
目的 通过对绵羊骨髓细胞抗菌肽(sheep myeloid antibacterial peptides with 29 amino acids,SMAP-29)的活性片段SMAP-29(1-18)基因的改造,使其以C-端融合蛋白的形式在大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中表达.方法 根据大肠埃希菌偏爱密码子表,将SMAP-29的活性片段SMAP-29(1-18基因序列进行改造,应用ProtParam分析SMAP-29的理化特性,Anthorprot软件预测其螺旋轮结构,设计新的基因片段,插入质粒pET-30a中,构建重组表达质粒pET-30aSMAP-29[1-18,K24,L13],转化感受态E coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物过2次Ni2+NTA His Bind resin 柱进行纯化.结果 SMAP-29基因序列经改造后,稳定性、等电点及半衰期均明显提高.重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确.表达的重组蛋白相对分子质量约61 257,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的41％,纯度为81％.结论 已成功对SMAP-29基因进行改造,实现了其在E.coli BL21(DE3)中的高表达,获得了纯度较高的目的蛋白,为进一步规模化生产SMAP-29奠定了理论及实践基础.
