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溶栓素定量方法的筛选系统
目的:建立蛋白类药物定量方法的系统评价体系.方法:采用Biuret蛋白定量法、二辛可宁酸定量法和染料结合定量法,通过筛选呈色产物的澄明度、溶解度、稳定性和兼容性,确定溶栓素的定量方法.结果:Biuret 蛋白定量法和二辛可宁酸定量法呈色产物的澄明度和溶解度较差,而染料结合定量法的呈色产物不仅具有良好的澄明度和溶解度,还具有较好的稳定性和兼容性.结论:由澄明度、溶解度、稳定性和兼容性组成的筛选体系可作为系统评价蛋白类药物定量方法的思路组合.
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不同方法对苦瓜核糖体失活蛋白的 PEG化学修饰后蛋白浓度测定的差异?
目的:探究 PEG 化学修饰对4种常用蛋白浓度测定方法的影响。方法采用福林-酚试剂法(Lowry 法)、二喹啉甲酸法(BCA 法)、考马斯亮蓝法(Bradford 法)和紫外分光光度法(UV 法)分别测定样品中α-苦瓜素和抗人类免疫缺陷病毒植物蛋白 MAP30经 PEG 修饰前、后的蛋白含量;并用 Lowry 法和 BCA 法对低浓度游离 PEG 修饰前、后的样品蛋白含量进行测定。结果发现考马斯亮蓝不与样品发生颜色反应,PEG 修饰后会使UV 法测定值变大,Lowry 法测定值略有变大,BCA 法基本不受影响;低浓度的游离 PEG 对测定方法无影响,但高浓度的 PEG 会吸附 Folin-酚,形成黄色絮状物。结论PEG 化学修饰对蛋白浓度测定方法影响小的为 BCA 法, Lowry 法灵敏,Bradford 法不适用;而 PEG 化学修饰会使 UV 法测定值增大20%~30%,可作为快速测定时的校准参考。