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MMP-11在胃癌组织的表达及其临床病理意义
根据2002年全球肿瘤发病率报告,胃癌是常见的肿瘤之一,仅次于肺癌,居第二位[1].尽管外科手术和放化疗技术不断发展,我国胃癌的死亡率居于各种肿瘤之首,5年生存率仍低于40％,大多数患者确诊时已经是Ⅱ或Ⅳ期,淋巴结转移率高达50％～75％.转移是导致胃癌患者死亡的主要原因[2].MMPs (基质金属蛋白酶)参与了许多生理和病理过程,比如基质降解、组织重塑、炎症反应以及肿瘤转移[3].MMP-11属于基质溶解素亚族,MMP-11不能降低这些经典的MMP基质,相反,它却能够催化丝氨酸蛋白酶抑制因子、α1抗胰蛋白酶、胰岛素样生长因子结合蛋白质1等的降解[4].MMP-11先在乳腺癌的间质细胞中被发现的[5].研究表明在不同的恶性肿瘤的进展过程中MMP-11起重要作用,比如肺癌、头颈癌、乳腺癌[6-10]发现MMP-11在结肠癌的表达与肿瘤的浸润深度、远处转移和分化程度相关,但与淋巴结转移无关.MMP-11在结肠、泌尿及卵巢癌中也高表达.MMP-11有望成为一个新的预后标记物.
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家蝇转录组丝氨酸蛋白酶抑制因子分析
目的 为了寻求有效控制家蝇的分子靶标,对家蝇丝氨酸蛋白酶抑制因子的主要种类进行初步探讨.方法 从家蝇转录组数据库中,筛查出所有注释为丝氨酸蛋白酶抑制因子的Unigenes,利用生物信息学分析技术,对这些Unigenes序列做比对、聚类与结构功能特点分析,并参照已报道的其他物种的丝氨酸蛋白酶抑制因子,对家蝇丝氨酸蛋白酶抑制因子进行初步分类.结果 从家蝇转录组库中共筛选出133条注释为丝氨酸蛋白酶抑制因子的Unigenes,其中,值得分析的序列有59条,具有典型丝氨酸蛋白酶抑制因子结构域的有22条,它们被初步分成11类.结论 本研究首次鉴定了11种家蝇丝氨酸蛋白酶抑制因子基因,为生物控制家蝇提供了重要的候选靶标.
关键词： 家蝇 丝氨酸蛋白酶抑制因子 转录组分析 基因鉴定 -
肝细胞生长因子激活因子抑制因子-1的表达与功能
肝细胞生长因子激活因子抑制因子-1(hepatocyte growth factor activator inhibitor type 1,HAI-1)是一种Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制因子,定位于细胞的基底侧,具有膜型和分泌型两种形式,能有效抑制肝细胞生长因子激活因子HGFA和丝氨酸蛋白酶Matriptase的活性,参与HGF/c-Met信号传导途径调节.HAI-1在包括妊娠、再生及肿瘤等各种正常生理及病理状态下均有不同水平的表达,其表达水平的变化以及其与靶蛋白酶表达比例的变化直接影响到靶蛋白酶的活性,从而在调控个体发育、血管生成、组织损伤修复以及抑制肿瘤的侵袭性生长等生理和病理过程中发挥重要作用.
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重组人Hespintor对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用
目的 完善重组Hespintor蛋白(rHespintor)的纯化方法,提高蛋白提取效率,并探讨其对肝母细胞瘤HepG2细胞增殖及侵袭作用的影响.方法 在重组蛋白提取中增加包涵体洗涤过程,更改蛋白纯化缓冲体系,并利用Na-苯甲酰-DL-精氨酸-对硝基酰胺盐酸盐(BAPNA)为作用底物,测定纯化的rHespintor对胰蛋白酶水解抑制活性.以空白组为对照组,通过MTT实验、细胞划痕愈合实验、肿瘤细胞侵袭实验分别检测rHespintor对肝母细胞瘤HepG2细胞生长的影响及作用效果.结果 对包涵体蛋白进行尿素梯度洗涤后可有效去除目的蛋白中绝大多数杂蛋白,一步纯化后,目的蛋白rHespintor具有较高胰蛋白酶水解抑制活性,且抑制效果呈剂量依赖关系.rHespintor作用于肝母细胞瘤HepG2细胞后,细胞增殖受到抑制,迁移能力减弱,侵袭的细胞数量显著减少.结论 rHespintor在体外可明显抑制肝母细胞瘤HepG2细胞的增殖及侵袭作用.
关键词： 重组蛋白质类 丝氨酸蛋白酶抑制因子 细胞增殖 细胞运动 细胞侵袭 -
SERPINA3K原核表达系统的构建及其表达
目的:通过构建丝氨酸蛋白酶抑制因子SERPINA3K的原核表达载体,并将其转化到Rosetta-g ami2感受态细胞中,表达重组SERPINA3K,从而为对其功能的深入研究奠定了基础.方法:以小鼠MS-1细胞cDNA为模板通过PCR的方法扩增Serpina 3k基因的表达全片段,再将其插入到原核表达载体pET-41a中,酶切并测序鉴定重组体.将构建好的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta-gami2感受态细胞,表达产物用Western blot鉴定.结果:原核表达载体pET-4 1a-Serpina 3k成功构建,可在大肠杆菌Rosetta-gami2中高效表达,得到重组蛋白SERPINA3K,经Western blot鉴定正确.结论:成功构建SERPINA3K原核表达载体且获得表达,为研究SERPINA3K生物学活性及产品开发提供了实验基础.
