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应用AnnexinV-FITC/PI-FCM定量分析对5-FU诱导卵巢癌细胞系凋亡的研究
目的应用AnnexinV-FITC/PI-FCM定量分析5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导卵巢癌细胞系OVC AR发生的凋亡.方法将5-FU以0、20mg/L、100mg/L、20 0mg/L的浓度,分别处理OVCAR细胞12、24、48小时,然后用形态学观察、DNA琼脂糖电泳和A nnexinV-FITC/PI流式细胞技术(flow cytometric,FCM)检测其诱发凋亡的情况.结果 AnnexinV-FITC-FCM分析见,随5-FU作用浓度增加、时间延长,凋亡细胞比例明显升高,差异显著(P<0.01),继发性坏死细胞比例增加,差异明显(P<0.05). 结论 5-FU可以诱发OVCAR细胞发生凋亡,应用AnnexinV-FITC/PI-FCM能对细胞凋亡定性的同时测出活细胞、凋亡细胞、继发性坏死细胞和培养操作过程中出现机械损伤细胞的比例 ,与传统方法相比,更能直观、准确地反映细胞凋亡与药物浓度及处理时间的关系.
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CD3/TCR复合物抗体诱导不成熟胸腺细胞亚群的凋亡
目的:采用AnnexinV,PI染色,流式细胞仪分析的方法、DNA琼脂糖电泳法检测不同CD3/TCR复合物抗体对小鼠胸腺T淋巴细胞亚群的促凋亡作用.方法:新鲜分离胸腺细胞,加入PMA、anti-TCR+ anti-CD28 mAb,anti-TCR mAb等培养20小时,AnnexinV,PI ,CD4,CD8细胞染色以及TCR三染,进行FACS分析,同时抽提培养细胞DNA进行琼脂糖电泳.结果:PMA+IONO诱导胸腺 T细胞的凋亡作用强,anti-TCR+ anti-CD28 mAb次之, anti-TCR mAb弱.结论:AnnexinV,PI细胞染色,流式细胞仪分析的方法可以灵敏检测T淋巴细胞的凋亡;anti-TCR+ anti-CD28 mAb能明显增强anti-TCR mAb促不成熟的CD4+CD8+TCR+和CD4+TCR+细胞的凋亡作用;不成熟T细胞经TCR与自身抗原结合的活性过程能产生克隆删除从而产生自我耐受.
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Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测结直肠癌细胞凋亡
目的:探讨化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导肿瘤细胞凋亡的作用特性,同时分析AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞术在检测细胞凋亡中的应用.方法:采用不同浓度的5-FU作用于培养的结直肠癌细胞株colo320,并设不同的时间段,应用流式细胞术和Hoechst33342荧光染色两种方法观察5-FU诱导肿瘤细胞凋亡的时间、剂量特性.结果:5-FU可以诱导colo320细胞的凋亡,80μg/ml作用4 h后AnnenxinⅤ单阳性即开始增多,至12 h,AnnenxinⅤ及PI双阳性即坏死细胞也开始增加.随药物浓度的提高,各组凋亡细胞所占比例也随之升高.流式细胞术与荧光染色的结果保持一致.结论:化疗药物5-FU诱导肿瘤细胞凋亡作用呈时间、剂量依赖.AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞术可用于检测早期的细胞凋亡事件,简单、灵敏,可作为检测细胞凋亡的首选方法.
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流式细胞术检测特发性血小板减少性紫癜患者血小板微粒
目的 建立CD61与Annexin V双染法检测外周血中循环血小板微粒的方法,探讨血小板微粒在特发性血小板减少性紫癜患者中的临床意义.方法 使用流式细胞术检测了12例特发性血小板减少性紫癜患者和15例健康对照者外周血中血小板微粒的含量.采用CD61与Annexin V双染法,CD61弱阳性并且Annexin V强阳性者定义为血小板微粒,分析血小板微粒的百分含量.结果 CD61与Annexin V双染法能够清楚地区分出富血小板血浆中血小板微粒.特发性血小板减少性紫癜患者血小板微粒为12.3%士5.4%,健康对照组为1.1%士0.3%,P＜0.05,差异显著.结论 CD61与AnnexinV双染法能够准确检出外周血中循环的血小板微粒.血小板微粒检测在特发性血小板减少性紫癜患者中有一定的临床意义.
关键词： CD61 AnnexinV 血小板微粒 流式细胞术 特发性血小板减少性紫癜
