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热休克蛋白27对人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用及其机制
目的:观察热休克预处理诱导的热休克蛋白27对晶状体上皮细胞的保护作用.方法:实验于2004-01/12在中国医科大学卫生部小儿先天畸形重点实验室完成.体外培养人晶状体上皮细胞系HLB-C3细胞,随机分为4组:①正常对照组.②氧化损伤组:细胞中加入200 μmol/L H2O2作用6 h.③热休克处理组:42℃预热30 min后,37℃恢复2 h,处理同氧化损伤组.④放线菌酮组:预热前30 min加入放线菌酮(25 mg/L),其余处理同热休克处理组.观察各组细胞存活率、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性;DNA ladder和Annexin V-FITC流式细胞仪检测晶状体上皮细胞凋亡率;免疫印迹法检测各组中热休克蛋白27和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达.结果:①细胞活力:氧化损伤组低于正常对照组(0.24±0.02,0.28±0.04,P＜0.01),热休克处理组高于氧化损伤组(0.27±0.04,P＜0.05),放线菌酮组低于热休克处理组(0.23±0.01,P＜0.01).②细胞凋亡率:氧化损伤组高于正常对照组[(15.69±1.54)%,(4.17±0.83)%,P＜0.01];热休克处理组低于氧化损伤组[(8.34±1.19)%,P＜0.01];放线菌酮组高于热休克处理组[(13.58±1.21)%,P＜0.01].③超氧化物岐化酶和过氧化氢酶活性:氧化损伤组低于正常对照组(P＜0.01),热休克处理组高于氧化损伤组(P＜0.05),放线菌酮组低于热休克处理组(P＜0.01).④热休克蛋白27表达:正常对照组细胞中略有表达,氧化损伤组表达稍有增加,热休克处理组表达明显增多,放线菌酮组未见表达.⑤半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达:正常对照组细胞表达较弱,氧化损伤组表达增多,热休克处理组的表达少于氧化损伤组.结论:热休克预处理诱导的热休克蛋白27对氧化损伤的晶状体上皮细胞起着保护作用.其保护机制可能是:①对与晶状体抗氧化有关的酶防御系统的影响:②小分子热休克蛋白对抗细胞凋亡.
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工频磁场对人晶状体上皮细胞DNA双链断裂的影响
目的:采用γH2AX免疫荧光法观察工频磁场对人晶状体上皮细胞DNA双链断裂的影响.方法:将人晶状体上皮细胞暴露于0.4 mT、50 Hz工频磁场2 h、6 h、12 h、24 h、48 h,以0.1 μmol/L的DNA损伤剂4-硝基喹啉-1-氧化物作用1 h作为阳性对照,结束处理后进行γH2AX免疫荧光检测.计算细胞平均焦点数.将细胞平均焦点数及焦点阳性细胞率作为评价细胞DNA双链断裂程度的指标.结果:工频磁场暴露24 h的平均焦点数、γH2AX焦点阳性细胞率分别为(2.93±0.43)、(27.88±2.59)%,与假辐照组(1.77±0.37)、(19.38±2.70)%相比,差异具有显著性(P<0.05);工频磁场暴露48 h的平均焦点数、γH2AX焦点阳性细胞率分别为(3.14±0.35)、(31.00±3.44)%,与假辐照组相比,差异具有显著性(P<0.01);而工频磁场暴露2 h分别为(2.11±0.61)、(22.44±5.09)%,6 h分别为(2.18±0.47)、(22.59±3.08)%和12 h分别为(2.35±0.43)、(23.35±2.93)%,与假辐照组比较,差异没有显著性(P>0.05).结论:体外实验表明,0.4 mT工频磁场长时间辐照可以使人晶状体上皮细胞DNA双链断裂增加.
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电磁噪声阻断1800 MHz手机辐射所致的晶状体上皮细胞内活性氧增加及DNA损伤
目的:探讨1800 MHz手机辐射对人晶状体上皮细胞内活性氧(ROS)和DNA损伤的影响,以及叠加电磁噪声后对该效应的阻断作用.方法:体外培养的人晶状体上皮细胞受比吸收率(specific absorption rate,SAR)为4 W/kg的1800 MHz手机频段间断辐射24 h或与2 μT电磁噪声联合作用24 h后,利用荧光探针检测ROS水平及用彗星试验检测DNA损伤水平.结果:4 W/kg手机辐射可明显诱发人晶状体上皮细胞内ROS及DNA损伤(P<0.001);与2 μT电磁噪声联合暴露后可明显阻断该效应,与手机单独辐射相比,差异有显著性(P<0.001),但与假辐照组比较差异无显著性(P>0.05).结论:电磁噪声可阻断1800 MHz手机辐射所诱发的晶状体上皮细胞内ROS及DNA损伤.
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TGF-β对眼晶状体上皮细胞影响的实验研究
晶状体后囊混浊是白内障囊外摘除术后常见的并发症,直接影响白内障术后视力恢复,因此研究后囊混浊的病因预防及减少或消除晶状体后囊混浊是提高手术效果的重要课题.本研究通过观察转化生长因子(TGF-β)对一组晶状体上皮细胞的影响,探讨其在后发性白内障形成中的作用,为后发性白内障的预防提供实验依据.
关键词： 上皮细胞/药物作用 肿瘤坏死因子/药理学 晶体/细胞学 -
反义bcl-2寡核苷酸对半乳糖诱导的晶状体上皮细胞中Bcl-2蛋白及细胞周期的影响
目的:探讨反义bcl-2寡核苷酸(bcl-2 ASODN)对半乳糖诱导的兔晶状体中Bcl-2蛋白表达及细胞周期的影响.方法:人工合成与bcl-2基因翻译起始区序列互补的寡核苷酸并磷酸化修饰,用半乳糖和bcl-2 ASODN处理体外培养的兔晶状体,流式细胞术检测bcl-2 ASODN对半乳糖诱导的LEC中Bcl-2蛋白表达水平及细胞周期的影响.结果:5.0～15.0μmol/L反义bcl-2寡核苷酸能下调半乳糖诱导的晶状体上皮细胞中Bcl-2蛋白的表达,荧光强度从158.70±2.14降至113.94±2.88,同时可降低S期细胞数,从20.60%降至0.67%.结论:bcl-2 ASODN能抑制半乳糖诱导的晶状体中Bcl-2蛋白的表达水平,阻止细胞进入S期,抑制细胞增殖.
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老年性白内障与正常晶体上皮细胞中差异表达基因的筛选
目的: 筛选老年性白内障与正常晶体上皮细胞的差异表达基因.方法: 利用改良消减杂交法获得差异cDNA,利用PCR法扩增其中大片段差异cDNA,将其克隆入质粒载体,通过反向点杂交排除假阳性克隆后,阳性克隆测序与GenBank中的序列进行比较,新序列进行计算机分析.结果: 在文库中随机挑选约600个克隆酶切鉴定,获得≥750 bp片段400个.经反向点杂交,排除假阳性克隆后,共得到阳性克隆150个;测序的50个片段中,有30个已知基因(包括20个功能已知基因、10个序列已知但功能未知基因),3个新序列.新序列中有一个的氨基酸序列与假想的锌指蛋白有45%同源性,可能参与细胞生长调控与代谢.结论: 改良消减杂交法可以快速有效地获得老年性白内障差异表达基因,对稀有基因及新基因的发现与功能鉴定有重要意义.
