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基于"升降开阖"通玄府的引经药诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化
背景:地黄饮子诱导的骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能恢复有明显的影响.目的:探讨应用"升降开阖"通玄府的引经报使药(升麻、牛膝分别置换薄荷)地黄饮子诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的可行性,并进一步研究在骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化中的调节作用.方法:取4周龄健康清洁级 SD大鼠骨髓,采用全骨髓贴壁法体外培养骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测第 3代细胞表面的骨髓基质标志 CD90和造血细胞标志 CD45.取第3代细胞,根据诱导条件不同分为4组:空白对照组、地黄饮子组、牛膝组、升麻组,空白对照组只用含体积分数为 1%胎牛血清的 DMEM/F12培养,后 3 组用地黄饮子含药血清、以牛膝为药引子的地黄饮子含药血清、以升麻为药引子的地黄饮子含药血清+体积分数为1%胎牛血清+DMEM/F12培养,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,诱导7 d后,采用免疫细胞化学法和 Western blot检测神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白的表达,RT-PCR检测胶质细胞源性神经营养因子、脑源性神经营养因子mRNA的表达.结果与结论:第 3 代骨髓间充质干细胞大致呈单一的长梭形或扁平形,紧密漩涡样排列生长,流式细胞仪示 CD90表达高达98%,而CD45表达仅1.3%.诱导7 d后,升麻组、牛膝组和地黄饮子组的细胞收缩变圆,向四周伸出多个明显突起,部分突起间存在连接,表现出典型的神经元样细胞形态,而空白对照组变化不明显.免疫组化染色显示牛膝组及升麻组神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白表达均高于地黄饮子组,牛膝组高于地黄饮子组,升麻组高于牛膝组,差异均有显著性意义(P < 0.05).Western blot检测结果与免疫细胞染色结果一致.RT-PCR检测胶质细胞源性神经营养因子、脑源性神经营养因子 mRNA改变类似于相应蛋白改变,升麻组>牛膝组>地黄饮子组>空白对照组,各组间差异均有显著性意义(P < 0.05).结果表明升麻、牛膝为药引子的地黄饮子可诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化,Wnt/β-catenin 信号通路可能在骨髓间充质干细胞向神经分化过程中起重要作用.
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中药临证运用“六讲究”
介绍中药临床运用中的六项讲究事项,即讲究剂型、讲究药引子、讲究药点距离、讲究给药途径、讲究奇正、讲究组合.
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地黄饮子含药血清对大鼠BMSCs与NSCs共培养影响转归的研究
目的 探讨以升麻为药引子的地黄饮子(CRD)含药血清对经过骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养后的大鼠神经干细胞(NSCs)的存活和分化的影响.方法 建立BMSCs与NSCs共培养模型,在共培养体系中加入CRD含药血清,从培养第3天开始分别进行5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性标志物微管相关蛋白2(MAP-2)、少突胶质细胞特异性表达蛋白标志物(MBP)免疫细胞化学双染色.采用流式细胞仪检测NSCs的存活率,利用细胞免疫荧光和Western blot法鉴定NSCs的分化情况,比较NSCs的存活率和分化率,分析CRD含药血清对共培养后NSCs的存活及分化的影响.结果 与生理盐水对照组相比,中、高浓度CRD含药血清在BMSCs与NSCs共培养体系中第7天能显著提高NSCs存活率和NSE、GFAP、MAP-2、MBP活性(P<0.01).结论 CRD含药血清在BMSCs与NSCs共培养体系中能促进NSCs有效分化和提高NSCs存活率.
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药引子浅论
目的:通过探析古今文献医案中关于药引子的记载及其应用,旨在明晰药引子的临床选用原则,以期更全面地认识药引子,从而拓宽思路,提高临床疗效.方法:从病名、定义、临床选用原则等方面,对历代重要医籍中关于药引子的论述进行搜集整理.结果:本文明确了药引子在中医药物治疗中的向导作用内涵,依次列举了药引子具体运用原则为:位置引、根据药物本身归经脏腑、根据药物气味性质、为病因引、为病理引、为强效、调和、解毒、为反佐以及特殊作用等选用原则.结论:“药引子”是中医独特之处,其灵动活泼,疗效神奇,对历代医案中“药引子”的研究可以学习中医随证遣药的用药思路,学习前人灵活应用药引子达到事半功倍的治疗效果,对后人临床应用有一定的借鉴作用.
