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FasL+组织工程化猪软骨细胞的同种异体移植
目的:探讨表达FasL的猪组织工程化软骨细胞在同种异体内的生长状况和免疫排斥反应.方法:实验于2002-09/2004-03在上海交通大学医学院,上海市免疫学研究所进行.①分离制备猪软骨细胞.②制备FasL+软骨细胞,构建重组pGCEN-FasL反转录病毒载体,转染PA317细胞.经G418筛选获得分泌pGCEN-FasL病毒颗粒的PA317细胞克隆,选择高滴度的病毒液,感染猪软骨细胞.再经过G418筛选获得FasL+的软骨细胞克隆,扩增培养.③FACS检测FasL的表达,应用JAM试验测定FasL+的软骨细胞诱导Fas+的Jurkat细胞及活化的T细胞的凋亡率.同时制备转染pGCEN反转录病毒空载体的软骨细胞为对照.④取FasL+的软骨细胞与可注射性生物材料Pluronic F127混合,注射于同种异体猪的腹壁皮下.在第4,5周取材,通过组织病理和免疫组织化学等方法,检测软骨细胞生长和免疫排斥反应.结果:①经转染的软骨细胞表面FasL的表达率为57%.②FasL+的软骨细胞具有明显诱导Fas+细胞和活化的同种异体T细胞的凋亡,大的凋亡率分别为53.41%,30.38%(效/靶=10∶1),对照组分别为32.27%,13.16%(效/靶=10∶1).③组织工程化猪软骨结节的结构与正常软骨组织基本一致,可见清晰的软骨凹陷和软骨膜,仅细胞排列较正常软骨略显混乱、不均匀现象.④免疫组织化学染色显示FasL+的组织工程化猪软骨结节的Ⅱ型胶原蛋白分布均匀,形状清楚,与正常软骨比较基本一致.⑤第5周的软骨细胞表面的FasL分子表达明显,周围的炎性细胞浸润相对较少.而对照组的软骨细胞周围可见到大量浸润的炎性细胞.结论:成功构建FasL+软骨细胞并有效表达,抑制免疫排斥反应,为建立同种异体软骨细胞移植的免疫耐受提供了实验依据.
