首页 > 文献资料
-
反义蛋白激酶Cγ寡核苷酸对原代培养大鼠脑神经元蛋白激酶Cγ mRNA表达与皮质和海马神经元增殖及神经突起生长的影响
目的:观察阳离子脂质体Lipofectamine介导的蛋白激酶Cγ AsODN对原代培养大鼠脑神经元蛋白激酶Cγ mRNA表达及生长的影响.方法:实验于2004-03/08在华中科技大学同济医学院附属同济医院完成.①实验分组:取新生50只SD乳鼠大脑皮质及海马神经元进行原代培养,分为正常对照组,空脂质体转染组,300 nmol/L Lipofectamine-SODN转染组,100 nmol/LLipofectamine-AsODN转染组,300 nmol/L Lipofectamine-AsODN转染组,每组10瓶.②实验方法:培养第4～5天采用脂质体或脂质体包裹的不同浓度的AsODN或SODN蛋白激酶Cγ转染培养神经元.③实验评估:采用倒置显微镜对神经元的生长进行动态观察;免疫组化ABC法进行蛋白激酶Cγ阳性神经元的鉴定;MTT法检测神经元的增殖率;RT-PCR方法检测转染后神经元的蛋白激酶Cγ mRNA的表达变化.结果:①蛋白激酶Cγ阳性神经元呈胞浆内棕褐色染色,胞核不显色.②蛋白激酶Cγ AsODN转染早期呈现促进神经元突起生长,胞体分化的作用.随着反义浓度增加,相对生长指数值升高.而在转染晚期,ASODN蛋白激酶Cγ转染组凋亡率均明显增加.③AsODN蛋白激酶Cγ可降低神经元蛋白激酶Cγ mRNA的表达.结论:蛋白激酶Cγ AsODN可减少神经元蛋白激酶Cγ mRNA的表达,并刺激皮质及海马神经元的增殖及神经突起的生长,这可能与蛋白激酶Cγ对神经元的生长起负性调控作用有关.
-
脂质体载体法转染成纤维细胞的佳条件
目前基因转染的方法有多种,其中磷酸钙-DNA沉淀法应用较为广泛,但其转化效率不高,且不太适用于悬浮细胞和原代细胞培养的上皮细胞的转化[1].本文介绍的Lipofectamine是一种新的多阴离子转染脂质体,其独特的精胺基团强负电子头部可自发地与DNA形成复合物,因而具有很强的转染能力[2].作者研究了影响成纤维细胞转染效率的相关因素,建立了较为满意的转染条件,为研究外源基因在成纤维细胞中的表达奠定基础.
关键词： 脂质体 转染 Lipofectamine 成纤维细胞 -
Lipofectamine2000介导重组siRNA质粒载体转染SGC7901的条件优化
目的 寻求Lipofectamine 2000介导外源基因体外转染胃癌细胞SCG7901的佳条件,建立有效的转染体系.方法 以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,统计分析在不同质粒与脂质体的用量比、培养基选择、转染作用时间等条件下脂质体介导外源基因导人胃癌细胞的效率.结果 用24孔板培养细胞时,在细胞融合度约90％,质粒用量为0.6μg,脂质体用量1.2μl (两者质量/体积比为1∶2),转染作用时间为8h时,转染效率为465％％,细胞存活率约78％.结论 按以上转染体系,可获得较为满意的结果.
关键词： Lipofectamine 2000 siRNA 转染 SGC7901 -
阳离子脂质体介导HSV-TK/ACV系统对人脑胶质瘤细胞增殖活性的影响
目的探讨HSV-TK/ACV系统对人脑胶质瘤细胞增殖活性的影响.方法用阳离子脂质体Lipofectamine将pCR3-Uni及含HSV-TK基因的真核表达载体pCR3-TK转染至人脑胶质瘤细胞株TJ905中,筛选出阳性克隆,阳性细胞克隆给予ACV(50mg/ml),72小时后,收集玻片,进行AgNOR染色.结果转染HSV-TK基因的细胞,在给予ACV后,细胞增殖活性明显降低,转染pCR3-Uni和pCR3-TK细胞克隆的AgNOR颗粒数分别为14.33和6.67(P<0.01).结论 AgNOR计数是一种操作简便、检测细胞增殖活性的方法,为研究HSV-TK/ACV系统的抗肿瘤机制提供帮助.
关键词： Lipofectamine HSV/ACV系统 胶质瘤 AgNOR 增殖活性 -
Dosper和Lipofectamine转染特点的比较
目的探讨Dosper和Lipofectamine两种脂质体转染载体的特点,为广泛应用打下基础.方法将新构建载体分别用Dosper和Lipofectamine在有血清和无血清情况下转染包装细胞PA317,通过NIH3T3细胞检测各组病毒滴度.结果在无血清组,Lipofectamine转染效率略高于Dosper,但两者无显著性差异(P＞0.05);在有血清组,Dosper组转染率显著高于Lipofectamine(P＜0.01).两者在有血清组的转染率均低于无血清组.结论在无血清存在下,Dosper和Lipofectamine转染效率都较高.
关键词： 基因转染 转染 脂质体 Dosper Lipofectamine -
阳离子脂质体Lipofectamine2000对人胰腺癌Capan-2细胞的毒性作用
目的 探讨阳离子脂质体Lipofectamine2000(Lipo)在一定浓度下对细胞毒性的作用机制.方法 应用一定毒性浓度的Lipo作用于胰腺癌Capan-2细胞,利用细胞直接记数法和流式细胞术检测其对Capan-2细胞生长、细胞凋亡和周期的影响.结果 Lipo与siRNA的浓度均影响转染率的高低.在2 ml转染体积中,Lipo在5μl的浓度下,使Capan-2细胞生长明显减慢,以第3天后更加明显(P<0.001).随着转染细胞按常规培养的时间延长,早期凋亡细胞明显增多(P<0.05),活性细胞明显减少(P<0.01),而损伤细胞和死亡细胞明显增多(P<0.001),以48 h后更明显:G0～G1期细胞明显增多(P<0.05),Gz-M期细胞明显减少(P
-
大鼠肝脏细胞及中国仓鼠肾脏成纤维细胞转染条件的优化
目的:应用携带有报告基因β-Gal的质粒对于使用Lipofectamine 2000转染大鼠肝脏细胞及中国仓鼠肾脏成纤维细胞条件进行优化.方法:在96孔板上按不同比例混合Lipofectamine 2000和质粒DNA后转染大鼠肝脏细胞及中国仓鼠肾脏成纤维细胞,成功转染的细胞因可表达β-Gal可分解底物X-gal在染液的存在下可使细胞呈蓝色,故计算蓝色细胞的比例即可了解转染的效率.应用方差分析的方法进行统计分析.结果:对于BHK细胞,当DNA与Lipofectamine 2000的比例为0.27∶0.8(μg∶μL)时转染效率高,为(43.2±9.3)%;对于BRL细胞,DNA与Lipofectamine 2000的比例为0.10∶0.3(μg∶μL)时转染效率高,可达(5.7±1.3)%.结论:Lipofectamine 2000可有效转染哺乳动物细胞,不同细胞有不同的佳转染条件.
关键词： 转染 细胞 Lipofectamine 大鼠 肝脏细胞
