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星形胶质细胞在糖皮质激素诱发糖尿病神经病理性痛中的作用
目的 探讨星形胶质细胞在糖皮质激素诱发糖尿病神经病理性痛中的作用及可能的机制.方法 利用链脲佐菌素诱导SD大鼠糖尿病模型,鞘内置管.实验分3组,对照组,糖尿病组(不给予RU486,糖皮质激素受体阻断剂),RU486组(糖尿病大鼠鞘内注射RU486).4周后检测大鼠血糖及痛阈变化,免疫组化检测脊髓背角星形胶质细胞形态学变化,Western blot检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP,星形胶质细胞活性标志物)及磷酸化Jun氨基末端激酶(p-JNK)表达变化.结果 与对照组相比,糖尿病组及RU486组大鼠血糖显著升高p＜0.01),糖尿病组脊髓背角星形胶质细胞胞体增大、突起延长,明显活化,而RU486组变化不明显.与对照组相比,糖尿病组痛阈降低,GFAP及p-JNK在脊髓表达减少(均P＜0.01),RU486组接近对照组(P＞0.05).结论 糖皮质激素通过血糖非依赖机制活化星形胶质细胞,激活JNK信号通路参与DNP的发生.
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加巴喷丁对糖尿病神经病理痛大鼠背根神经节Nrf2表达的影响
目的 研究糖尿病神经病理痛大鼠背根神经节(DRG)Nrf2表达的变化,探讨加巴喷丁(gabapentin,GBP)减轻大鼠糖尿病神经病理痛的机制.方法 雄性SD大鼠60只,随机分为4组:对照组(C组)、模型组(DNP组)、生理盐水+DNP组(SC+DNP组)和加巴喷丁+DNP组(GBP+DNP组,n=15).观察STZ注射前1 d及注射后3、7、10、14、21、28 d测定缩足反射机械刺激阈值(PWMT)和缩足反射热辐射潜伏期(PWTL),SC+DNP组和GBP+DNP组于STZ注射15 d起分别腹腔注射生理盐水或加巴喷丁50 mg/kg,1次/d,连续7 d,并于21、28 d测定缩足反射机械刺激阈值和缩足反射热辐射潜伏期.行为学测试完成后选择21 d大鼠用免疫荧光和Western印迹方法检测大鼠DRG中Nrf2的表达.结果 与C组比较,DNP组和SC+DNP组出现PWMT降低,PWTL缩短,DRG中Nrf2的表达减少(P<0.05);与DNP组比较,GBP+DNP组PWMT升高,PWTL延长,DRG中Nrf2的表达明显增加(P<0.05),SC+DNP组差异无统计学意义(P>0.05).结论 加巴喷丁可能通过上调DNP大鼠DRG中Nrf2表达,从而减轻大鼠DNP.
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加巴喷丁对糖尿病神经病理痛大鼠背根神经节Toll样受体4表达的影响
目的 探讨加巴喷丁(gabapentin,GBP)对糖尿病神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain,DNP)大鼠背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达的影响. 方法 108只成年健康雄性SD大鼠,采用完全随机分组法分为4组:对照组(C组)、模型组(DNP组)、生理盐水(SC)+DNP组和GBP+DNP组(每组27只).观察链脲佐菌素(streptozocin,STZ)注射前1d及注射后3、7、10、14、21、28 d测定缩足反射机械刺激阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和缩足反射热辐射潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL),SC+DNP组和GBP+DNP组于STZ注射15d起分别腹腔注射生理盐水或GBP 50 mg/kg,1次/d,连续7d,并于21、28 d测定PWMT和PWTL.行为学测试完成后选择21 d大鼠用免疫组化和Western blot方法检测大鼠DRG中TLR4的表达. 结果 与C组比较,DNP组PWMT (3.9±0.9)g降低,PWTL[(6.1±0.8)s]缩短,DRG中TLR4蛋白的表达显著上调(P＜0.05)；与DNP组比较,SC+DNP组大鼠在腹腔注射生理盐水后,PWMT、PWTL和TLR4蛋白的表达无明显改变(P＞0.05)；与DNP组和SC+DNP组比较,GBP+DNP组PWMT(8.3±0.8)g升高,PWTL[(9.9±1.2)s]延长,DRG中TLR4蛋白的表达下调(P＜0.05). 结论 GBP可通过抑制DRG中TLR4表达,从而减轻大鼠DNP.
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miR-145下调Nav 1.8对糖尿病神经病理性痛大鼠痛阈的影响
目的 观察微小 RNA-145(miR-145)对糖尿病神经病理性痛大鼠痛阈的影响,并探讨其可能机制.方法 取正常大鼠12只作为对照组(N组),糖尿病神经痛模型制备成功的 SD大鼠36只,随机分为三组:糖尿病神经痛组(D组)、糖尿病神经痛-空载组(DN组)和糖尿病神经痛-miR-145过表达组(agomiR-145组),每组12只.N 组和 D组大鼠鞘内分别注射等剂量生理盐水10 μl, DN组大鼠鞘内注射阴性对照病毒(10 μl,1×106TU/ml),agomiR-145组大鼠鞘内注射 agomiR-145(10 μl,1×106TU/ml).于鞘内注药前1 d 和注药后1、3、7、14 d 测定四组大鼠机械缩足痛阈(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL).然后采用RT-PCR法检测大鼠背根神经节(DRG)中miR-145 mRNA相对表达量,免疫荧光检测大鼠背根神经节 Nav1.8阳性细胞荧光相对强度.荧光素酶报告实验验证 miR-145的靶基因.结果 注药前1 d D 组、DN 组和 agomiR-145组 MWT 明显低于、TWL 明显短于N组(P<0.05);注药后3、7、14 d agomiR-145组MWT明显高于D组和DN组(P<0.05);注药后7、14 d agomiR-145组大鼠TWL明显长于 D 组和 DN 组(P<0.05).D 组和 DN 组DRG中 miR-145 mRNA相对表达量明显低于 N 组和 agomiR-145组,电压门控钠离子通道1.8 (Nav1.8)阳性细胞明显多于 N组和 agomiR-145组(P<0.05).荧光素酶报告实验验证 miR-145作用于 Nav 1.83'-非翻译区并调控 Nav1.8的表达.结论 miR-145通过下调背根神经节 Nav 1.8表达缓解糖尿病大鼠机械痛敏和热痛敏.
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糖尿病模型大鼠痛觉的心理生理学观察
目的:探讨糖尿病模型大鼠的痛反应、痛感觉、痛情绪的变化及其心理生理特性.方法:成年SD大鼠18只随机均分为对照组和糖尿病模型组,模型组用链唑霉素(STZ)腹腔注射法制备.在造模前、造模后第21天,检测两组大鼠的光辐射热甩尾反应潜伏期.并在第21天的检测后,对麻醉大鼠的痛感觉代表区异颗粒区(DZ)和痛情绪代表核团基底外侧杏仁核(BLA)电活动,以及心电、呼吸肌肌电、皮肤电导、体温进行心理生理学记录,并观察热、夹尾刺激的影响.结果:模型组大鼠血糖在STZ注射后维持在＞16 mmol/L,其甩尾反应潜伏期较正常组缩短(P＜0.01).模型组大鼠的BLA基础放电频率高于正常组(P＜0.01),两组大鼠BLA、DZ的放电频率在两种伤害性刺激时均提高(P＜0.05),热刺激时,模型组大鼠反应时BLA、DZ的放电频率增加高于正常组(P＜0.05),而在夹尾刺激时,模型组仅BLA的放电频率增加高于正常组(P＜0.05).同时,两种刺激导致两组大鼠均出现心率、呼吸频率加快,但正常组在热刺激后心率、呼吸频率较快恢复,模型组未完全恢复(P＜0.01).结论:糖尿病模型大鼠的痛反应显著敏化,且伤害性刺激所诱发的痛感觉、痛情绪及其生理反应亦明显增强.
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加巴喷丁对糖尿病神经病理痛大鼠背根神经节 FGF-2表达的影响
目的：观察加巴喷丁（ GBP）对链脲佐菌素（ STZ）诱导糖尿病神经病理性痛（ DNP）大鼠背根神经节成纤维细胞生长因子2（FGF-2）蛋白表达的影响，以探讨其镇痛机制。方法将80只SD大鼠随机分为C组、DNP组、SC＋DNP组和GBP＋DNP组，各20只。除C组外，其他各组采用腹腔注射STZ建立DNP模型。 SC＋DNP组和GBP＋DNP组在造模第15天开始分别腹腔注射生理盐水、GBP（50 mg／kg），每天1次，连续7 d。在造模前1天及造模后3、7、10、14、21、28天测定各组大鼠的缩足反射机械刺激阈值（ PWMT ）和缩足反射热辐射潜伏期（ PWTL ）；免疫组织化学法和Western blotting法检测大鼠背根神经节中的FGF-2。结果与C组相比，DNP组、SC＋DNP组、GBP＋DNP组造模后3、7、10、14、21、28天PWMT和PWTL低（P均＜0．05）。与DNP组及SC＋DNP组相比，GBP＋DNP组造模后21天PWMT和PWTL高（P均＜0．05）。造模后21天，DNP组、SC＋DNP组和GBP＋DNP组背根神经节内FGF-2蛋白含量较C组高，GBP＋DNP组较DNP组、SC＋DNP组低（P均＜0．05）。结论 GBP可通过抑制DNP大鼠背根神经节内FGF-2的表达，从而减轻大鼠神经病理性痛。
关键词： 加巴喷丁 糖尿病神经病理性痛 背根神经节 成纤维细胞生长因子2 -
糖尿病神经病理性痛大鼠脊髓背角USP49和FKBP51的表达与作用
目的 研究泛素特异性蛋白酶49(USP49)和FK506结合蛋白51(FKBP51)在糖尿病神经病理性痛(DNP)大鼠脊髓背角中的表达及作用. 方法 SD雄性大鼠通过高糖高脂饮食饲养和腹腔注射1％链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型并按照随机数字表法分为DNP组、对照短发夹RNA(shRNA)组和USP49沉默组,每组10只.3组大鼠分别鞘内注射生理盐水、Ad-scrambledshRNA(3×108 PFU/mL)、Ad-USP49-shRNA(3× 108 PFU/mL).另取10只正常大鼠作为对照组,不做任何处理.分别于造模前1d、造模后1d、7d、鞘内注射后1、3、7d测定大鼠热缩足潜伏期(TWL)和机械缩足反应阈(MWT),并检测背角神经元USP49、FKBP51、糖皮质激素受体α(GRα)mRNA和蛋白的表达水平. 结果 (1)造模前1d,4组大鼠TWL差异无统计学意义(P＞0.05).鞘内注射后3d、7d,USP49沉默组TWL明显长于DNP组,短于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)造模前1d,4组大鼠MWT差异无统计学意义(P＞0.05).鞘内注射3d、7d后,USP49沉默组MWT明显高于DNP组,低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)与DNP组比较,USP49沉默组USP49mRNA、FKBP51 mRNA表达显著下降,GRα mRNA表达显著上升,差异有统计学意义(P＜0.05).(4)与DNP组比较,USP49沉默组USP49蛋白、FKBP51蛋白表达明显降低,GRα蛋白明显上升,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 特异性沉默脊髓背角神经元USP49表达可改善DNP大鼠热痛敏反应和机械痛敏反应,其机制可能与USP49介导的FKBP51蛋白去泛素化有关.
