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MicroRNA-590-3p对人胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭能力的调控
目的 研究microRNA-590-3p (miR-590-3p)对人胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 从石蜡包埋的1 1例胃癌组织和11例正常组织中提取总RNA,应用Real-time PCR方法检测miR-590-3p的表达水平;培养胃癌细胞SGC-7901,应用Lipofectamine(R) LTX试剂将化学合成的miR-590-3p antagomir和miR-590-3p agomir转染SGC-7901细胞,验证转染效率后应用MTT发检测细胞增殖能力的变化;应用Transwell小室法检测SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的变化;应用Western Blot方法检测上皮钙粘素(E-cadherin)的蛋白表达水平.结果 与正常组织相比,miR-590-3p在胃癌组织中的表达水平显著增高.与对照组相比,miR-590-3p表达沉默能够显著抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭能力,显著增加E-cadherin的蛋白表达水平.miR-590-3p过表达的作用与之相反.结论 MiR-590-3p沉默抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,迁移和侵袭可能与上调E-cadherin蛋白表达相关.
关键词： MiR-590-3p 人胃癌SGC-7901细胞 增殖 迁移 侵袭 -
miR-590-3p调控人肝星状细胞LX-2TGF-β/SMAD通路抗肝纤维化的研究
目的 建立转化生长因子-β1 (TGF-β1)诱导人肝星状细胞LX-2体外纤维化模型,观察miR-590-3p对肝纤维化影响.方法 设计并合成miR-590-3p模拟物和miR-590-3p抑制剂,瞬时转染至LX-2细胞,再经TGF-β1诱导24h后,荧光定量PCR检测胞内miR-590-3p表达,Western Blot检测胞内纤维化相关蛋白Smad 4及Collagen Ⅰ表达变化,并分析胞内miR-590-3p表达改变对细胞纤维化指标的影响.结果 miR-590-3p过表达下调Smad 4蛋白水平表达50％(P＜0.05),抑制miR-590-3p功能上调Smad 4蛋白表达50％ (P＜0.05).结论 miR-590-3p可能通过下调LX-2 Smad4的表达,影响LX-2活化,在肝纤维化进程中发挥重要作用.
关键词： MiR-590-3p 肝星状细胞 肝纤维化 -
miR-590-5p和miR-590-3p参与肝细胞肝癌发展的机制
目的 研究miR-590的两个臂-miR-590-5p和miR-590-3p对肝癌细胞增殖能力的影响,以及参与肿瘤发生发展的机制.方法 利用miRNA芯片、QPCR对肝癌标本和各细胞株miR-590的表达谱系进行分析和验证.通过脂质体将miR-590 mimic或inhibitor转染正常肝细胞或肝癌细胞,MTT生长曲线分析和软琼脂克隆形成实验检测转染后细胞增殖及存活能力的变化.Targetscan预测miR-590-5p和miR-590-3p的靶基因,并通过萤光素酶报告系统以及western blot进行验证.结果 miRNA芯片结果显示3个肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织相对于癌旁正常组织,miR-590-5p和miR-590-3p表达上调.通过QPCR验证了10例临床HCC肿瘤标本发现80％的HCC组织相对于癌旁组织miR-590-5p和miR-590-3p均同步显著上调.QPCR结果进一步发现,HepG2、Hep3B、Huh7三株HCC细胞株相对于正常肝细胞株L-O2 miR-590-5p/3p同样表达上调.MTT和软琼脂克隆形成结果显示,L-O2分别过表达miR-590-5p和miR-590-3p,细胞的增殖能力都显著增加(P＜0.05)；而HepG2、Hep3B、Huh7分别下调miR-590-5p和miR-590-3p的表达后,细胞的增殖能力也都显著降低(P＜0.05).Targetscan预测,PDCD4和PTEN分别作为miR-590-5p和miR-590-3p的潜在靶基因.萤光素酶报告系统以及western blot结果显示miR-590-5p和miR-590-3p可以分别直接下调靶基因PDCD4和PTEN的表达(P＜0.05).进一步我们发现miR-590-3p通过下调PTEN激活PI3K-AKT信号通路,促进AKTl-S473的磷酸化水平.结论在HCC发展过程中miR-590扮演着重要的致癌因子角色,我们结果发现miR-590的两个臂都具有促进肿瘤发生的生物学功能,它们分别通过靶向调节抑癌基因PDCD4和PTEN的表达来促进HCC细胞的增殖和存活,并激活核心的PI3K-AKT肿瘤信号通路.由此可见miR-590在HCC发生发展过程中具有重要的意义,也可作为临床诊治潜在的新靶标.
关键词： miR-590 miR-590-5P MiR-590-3p 肝细胞肝癌 PDCD4 PTEN 增殖
