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丹参对体内外CD8+T细胞抑制作用及白癜风小鼠的治疗作用
目的:探讨丹参的体内外抑制CD8+T细胞增殖及其对脱色小鼠的治疗作用.方法:通过MTS法检测丹参对体外培养的CD8+T细胞增殖的抑制,体内通过丹参对莫诺苯宗诱导的C57BL/6小鼠脱色影响的研究,应用40％莫诺苯宗乳膏诱导C57BL/6小鼠脱色,建立白癜风动物模型;并通过丹参对白癜风小鼠的治疗,研究丹参对小鼠脱色的影响;用肉眼观察毛发脱色,通过共聚焦激光扫描显微镜(RCM)观察皮肤脱色,并予以免疫荧光检测CD8+T细胞浸润.结果体外研究300 μg/mL和500 μg/mL丹参对CD8+T细胞增殖的抑制情况,随着浓度增加其抑制更为明显,高浓度组抑制率可达82.05％.体内研究高浓度组丹参对模型小鼠治疗效果显著,脱色斑面积指数较模型组低(P＜0.05),复色部位皮肤CLSM表现可见树突状,折光明亮的黑素细胞,且在非用药部位脱色斑皮肤CD8+T细胞浸润显著减少.低浓度组无效果,中浓度组效果不明显.结论丹参对莫诺苯宗诱导的白癜风小鼠具有治疗作用,为临床应用提供实验依据,并说明该动物模型可以用于中药筛选研究.
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茶多酚、吡美莫司、他克莫司外用对莫诺苯宗诱导白癜风样模型小鼠的疗效比较
目的 探讨茶多酚、吡美莫司、他克莫司对莫诺苯宗诱导的白癜风样模型小鼠的疗效差异.方法 45％莫诺苯宗诱导C57BL/6三周龄雌小鼠脱色,建立白癜风样动物模型.并研究他克莫司、吡美莫司、茶多酚对白癜风样模型小鼠脱色的治疗效果.通过肉眼观察毛发脱色及脱色面积,实验结束后取非用药部位脱色皮肤行组织学检查,HE染色检测淋巴细胞浸润情况,共聚焦激光扫描显微镜(RCM)观察小鼠皮肤的黑素和黑素细胞,免疫荧光检测CD8+T细胞.结果 模型组小鼠在用药部位及非用药部位均有脱色现象.他克莫司组、吡美莫司组、茶多酚组小鼠脱色减少,出现时间晚和面积指数均较模型组低;且用药部位脱色斑局部淋巴细胞和CD8+T细胞浸润减少.其中他克莫司组疗效优于其他组.结论 他克莫司、吡美莫司、茶多酚对白癜风样模型小鼠均有疗效.
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局部针刺对莫诺苯宗诱导C57BL/6小鼠白癜风样模型的影响
目的 探讨外伤对莫诺苯宗诱导白癜风小鼠脱色的影响.方法 将40只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、针刺组和针刺配合莫诺苯宗组4个组,每组10只.模型组应用40％莫诺苯宗乳膏诱导C57BL/6小鼠脱色,建立白癜风动物模型;针刺配合莫诺苯宗组通过针刺配合40％莫诺苯宗乳膏的方法,研究针刺对小鼠脱色的影响.实验过程中肉眼观察毛发颜色以及共聚焦激光扫描显微镜(RCM)观察皮肤脱色.实验结束后麻醉小鼠,取非用药部位脱色皮肤行组织学检查,HE染色检测淋巴细胞浸润情况,免疫荧光染色检测CD8+T细胞表达.结果 模型组小鼠在用药部位及非用药部位均有不同程度脱色.针刺配合莫诺苯宗组小鼠同样具有以上特点,且其脱色出现时间早,面积大并稳定.实验第65天,模型组和针刺配合莫诺苯宗组用药部位的脱色面积指数分别为3.45±0.17和3.90±0.25,两组比较差异有统计学意义,t=7.433,P＜0.05;非用药部位分别为1.90±0.12和2.85±0.27,两组比较差异有统计学意义,t=7.529,P＜0.05.免疫荧光显示非用药部位脱色区CD8+T细胞荧光强度模型组为175.528±10.711,针刺配合莫诺苯宗组为645.928±12.652,两者比较差异有统计学意义,t=8.105,P＜0.05.针刺配合莫诺苯宗组在非用药部位脱色斑局部淋巴细胞和CD8+T细胞浸润更明显.结论 局部皮肤屏障破坏可以促进莫诺苯宗诱导的白癜风小鼠脱色.
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黄芩苷对白癜风小鼠模型的作用机制研究
目的:探讨黄芩苷对莫诺苯宗诱导的白癜风小鼠模型发生发展的影响及其机制.方法:C57BL/6小鼠共40只分为4组,即阴性对照组、模型组、卤米松组及5％黄芩苷组,每组10只.应用40％莫诺苯宗乳膏诱导C57BL/6小鼠脱色,建立白癜风小鼠模型;进行5％黄芩苷对白癜风小鼠的疗效观察及其机制研究等;连续给药50 d,通过肉眼观察小鼠的毛发脱色,反射共聚焦显微镜(RCM)观察皮肤的黑色素和黑素细胞,免疫荧光检测CD8T细胞.选取与白癜风相关的5个基因(CXCL9,CXCL10,CXCR3,RAB27A,PI3K)进行荧光实时定量PCR检测.结果:模型组小鼠在用药部位及非用药部位有毛发脱色现象.卤米松组和5％黄芩苷组小鼠脱色减少,较模型组发生率明显降低、脱色出现时间明显延迟,脱色面积减小,且局部淋巴细胞和CD8+T细胞浸润较模型组明显减少.荧光实时定量PCR检测提示卤米松组和5％黄芩苷组CXCL9、CXCL10、CXCR3和RAB27A表达较模型组明显降低,而PI3K则升高明显.卤米松组和5％黄芩苷组之间无明显差异,但卤米松组用药30 d后,用药部位出现皮肤萎缩等不良反应.结论:卤米松组和5％黄芩苷组均具有治疗效果,黄芩苷组更安全有效,可为临床白癜风的治疗提供参考.
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莫诺苯宗联合咪喹莫特对C57BL6小鼠白癜风造模的作用研究
目的:探讨莫诺苯宗联合咪喹莫特对C57BL6小鼠白癜风造模的作用,以构建稳定、效果佳的白癜风模型,为治疗白癜风的药理、药效及机制研究奠定基础.方法:将30只4周龄的C57BL6小鼠分为A、B、C共3组,分别予A组40％莫诺苯宗联合5％咪喹莫特、B组40％莫诺苯宗、C组5％咪喹莫特涂搽小鼠下背部,每组每日涂药1次,连续涂搽60天.另取5只C57BL6小鼠为阴性对照组,不予任何处理.结果:A组与B组涂药2周后涂药部位均出现色素脱失,两组开始脱色的时间比较,差异无统计学意义(t=1.23,P＞0.05),但2个月后两组涂药部位脱色积分比较,差异有统计学意义(￡=2.43,P＜0.05);A组非涂药部位色素脱失情况较B组相比,差异有统计学意义(t=2.45,P＜0.05);C组仅可见1只小鼠涂药部位出现少量脱色.阴性对照组见未脱色及脱毛.结论:莫诺苯宗联合咪喹莫特对C57BL6小鼠白癜风造模的效果优于莫诺苯宗或咪喹莫特单独使用组.
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莫诺苯宗乳膏的制备与质量控制
目的:研究莫诺苯宗乳膏的制备及质量控制.方法:采用乳化法制备莫诺苯宗乳膏,采用RP-HPLC法测定乳膏中莫诺苯宗的含量,并进行样品稳定性实验.结果:该制剂制备工艺简单易操作,质量控制标准与方法可行,莫诺苯宗质量浓度在(0.05～0.5)mg/ml浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9990).平均回收率为99.90%,RSD为0.65%.结论:莫诺苯宗乳膏处方合理,配制工艺可行,质量稳定.
