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Nrf2信号通路在锰致雄性小鼠生殖毒性中的作用
目的 研究锰对雄性小鼠睾丸Nrf2信号通路的影响,探索锰致雄性生殖障碍的机制.方法 将48只雄性昆明小鼠随机分为对照组、高锰组、高锰+叔丁基对苯二酚(tBHQ)干预组和高锰+异烟肼(INH)干预组.对照组、高锰组皮下注射生理盐水,tBHQ干预组皮下注射50 mg/kg tBHQ,INH干预组皮下注射100 mg/kg INH.2h后对照组腹腔注射生理盐水,其余三组腹腔注射50 mg/kg MnCl2.注射容量均5 ml/kg,持续4周.HE染色观察小鼠睾丸组织形态改变;Western blotting测定睾丸组织内Nrf2、SOD2及GPx-1的蛋白表达水平.结果 与对照组比较,高锰组小鼠睾丸组织形态出现损伤;与高锰组比较,tBHQ干预组小鼠睾丸组织形态损伤出现恢复;INH干预组损伤加剧.与对照组比较,高锰组睾丸组织内Nrf2、SOD2及GPx-1的蛋白水平分别下降49.14％、49.42％、39.06％;与高锰组比较,tBHQ干预使上述指标恢复,Nrf2、SOD2及GPx-1分别升高35.77％、31.77％、41.52％;INH干预使之加剧,Nrf2、SOD2及GPx-1分别下降32.71％、14.65％、40.31％.结论 锰暴露可通过干扰Nrf2信号通路,造成睾丸组织病理损伤,产生生殖毒性.
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tBHQ对无机砷诱导HaCaT细胞凋亡中的保护作用
目的 观察tBHQ对内源性线粒体凋亡通路和凋亡相关蛋白Bcl-2等蛋白表达的影响,探讨tBHQ在无机砷诱导HaCaT细胞凋亡过程中的作用.方法 采用分光光度法检测Caspase-3蛋白活力;Western blot法分析细胞内Caspase-3、CytC、Bcl-2和Bax蛋白表达水平.结果 NaAsO2单独作用于HaCaT细胞24 h,线粒体中Cyt C蛋白表达降低,而胞浆中Cyt C蛋白表达则随染砷剂量的增加而明显升高.tBHQ预处理12 h后再分别暴露于NaAsO2,线粒体中CytC蛋白表达明显恢复,胞浆中CytC蛋白表达则随tBHQ剂量的增加而明显回落.此外,NaAsO2单独作用于HaCaT细胞24 h,Procaspase-3蛋白表达降低,而Caspase-3活化程度均显著高于对照组(P＜0.01),tBHQ预处理12 h后再暴露于NaAsO2,Procaspase-3蛋白表达均明显高于相同浓度砷单独作用组,而且Caspase-3酶活力得到明显抑制,差异均具有统计学意义(P＜0.05).NaAsO2单独作用于HaCaT细胞24 h,与对照组相比Bcl-2蛋白表达降低,而Bax蛋白表达明显升高.tBHQ预处理12h后再分别暴露于NaAsO2,Bcl-2蛋白表达明显恢复,而Bax蛋白表达则随tBHQ剂量的增加而减少.结论 tBHQ能够影响线粒体凋亡途径拮抗NaAsO2诱导的人皮肤角质细胞凋亡;tBHQ能够诱导调控凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax从而发挥抗凋亡作用.
关键词： 叔丁基对苯二酚(tBHQ) 亚砷酸钠 HaCaT细胞 -
tBHQ对NaAsO2诱导HaCaT细胞凋亡的拮抗作用
目的 探讨叔丁基对苯二酚(tertiary butylhydroquinone,tBHQ)对亚砷酸钠(NaAsO2,sodium arsenite)诱导人角质上皮HaCaT细胞凋亡的拮抗作用.方法 tBHQ(10、25、50μmol/L)预处理12h,再与NaAsO2(5、10、30 μmol/L)共同处理HaCaT细胞24 h.用Annxin V/PI染色流式细胞术法检测细胞凋亡率；DAPI染色观察细胞形态学改变；JC-1法测定线粒体膜电位.结果 将实验数据进行ANOVA分析处理后表明,5,10、30 μmol/L NaAsO2单独作用时,细胞凋亡率与对照组相比显著升高,而线粒体膜电位则显著下降(P＜0.05或P＜0.01),形态学观察可见高强度DAPI染色细胞数目增加和凋亡小体出现；当给予tBHQ(10、25、50 μmol/L)预处理后,NaAsO2致HaCaT细胞凋亡率升高和线粒体膜电位下降均明显受到抑制(P＜0.05),形态学观察可见高强度DAPI染色细胞数目和细胞核碎片明显减少.结论 实验结果表明tBHQ可能通过线粒体凋亡途径抑制NaAsO2引起的HaCaT细胞凋亡.
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激活Nrf2-ARE通路改善尿毒症患者血清诱导的内皮细胞功能障碍及其机制
[目的]探讨激活核因子E2相关因子2(Nr-f2)-抗氧化反应元件(ARE)通路改善尿毒症患者血清诱导的内皮细胞功能障碍的作用及其机制.[方法]体外培养人主动脉内皮细胞,分别与10％正常人血清、10％非糖尿病尿毒症患者血清及10％糖尿病尿毒症患者血清共培养,同时用20 μmol/L叔丁基对苯二酚(tBHQ)预处理入主动脉内皮细胞4h,实验分为6组:正常人血清组、非糖尿病尿毒症患者血清组、糖尿病尿毒症患者血清组、正常人血清+tBHQ组、非糖尿病尿毒症患者血清+tBHQ组、糖尿病尿毒症患者血清+tBHQ组.流式细胞学技术检测细胞凋亡率、一氧化氮(NO)含量;Western blotting检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、醌氧化还原酶1(NQO1)的表达情况,同时检测细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽(GSH)的水平.[结果]尿毒症患者血清培养的入主动脉内皮细胞有显著的功能障碍,细胞凋亡率、MDA水平增高(P＜ 0.05);NO含量、P-eNOS9ser1177/eNOS(丝氨酸1177磷酸化内皮型一氧化氮合酶,P-eNOSScr177)、SOD、CAT及GSH的水平均降低(P＜ 0.05);tBHQ预处理可降低尿毒症血清条件下入主动脉内皮细胞的凋亡率和MDA含量(P＜0.05),增加NO的产生、eNOS-mRNA表达、P-eNOSSer1177/eNOS、SOD、CAT和GSH的水平(P＜0.05).[结论]激活Nrf2-ARE通路可改善尿毒症血清诱导的人主动脉内皮细胞功能障碍,增强抗氧化应激反应可能是其机制之一.
