首页 > 文献资料
-
亚洲牛带绦虫NOMO1基因在原核细胞中表达
目的 构建亚洲牛带绦虫NOMO1基因原核重组质粒,进行原核表达、纯化及免疫学研究.方法 以亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中含NOMO1基因的质粒作为模板,扩增该基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,测序鉴定重组质粒后再行诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,并用蛋白免疫印迹(Western-blotting)分析其免疫反应性.结果 成功建构了原核重组质粒pET28a(+)-NO-MI1.该基因在大肠埃希菌中以包涵体形式存在,破包涵体后纯化蛋白通过SDS-PAGE鉴定结果表明该基因在大肠埃希菌BL-21/DE3得到高效表达.Western blotting结果显示,该重组蛋白可被亚洲牛带绦虫、牛带绦虫病人血清识别,具有免疫反应性.结论 成功克隆亚洲牛带绦虫NOMO1基因、表达和纯化得到了该基因的重组蛋白并且证明该基因具有免疫反应性,为进一步研究该基因的功能提供条件.
-
Nodal信号通路相关基因NOMO1在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达
目的:研究斑马鱼NOMO1基因在早期胚胎发育过程中的时空表达情况.方法:首先克隆斑马鱼NOMO1同源基因全长cDNA,然后运用半定量RT-PCR技术初步检测NOMO1基因在斑马鱼早期胚胎的表达情况,后通过原位杂交技术检测NOMO1基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的时空表达情况.结果:通过半定量RT-PCR及原位杂交技术显示NOMO1从受精卵时期开始即有表达,在24 hpf(受精后24 h)之前,NOMO1基因表达广泛,并主要集中在中、内胚层.从24 hpf开始其表达主要集中于神经系统如前脑、中脑、小脑、脊索前板、眼和耳囊等处.在心脏处也有少量表达.结论:NOMO1基因对斑马鱼早期胚胎发育具有一定的作用,推测NOMO1基因影响早期心脏发育.
-
NOMO1基因在大鼠胚胎心脏发育过程中的表达
目的:检测NOMO1基因在SD大鼠胚胎心脏发育过程中mRNA表达变化及定位,并探讨其在胚胎心脏发育的意义.方法:24只孕鼠随机分为6组,每组4只,分别于妊娠12 d(D12)、15 d(D15)、16 d(D16)、17 d(D17)、19 d(D19)、21 d(D21)时取出胎鼠,取其心脏,采用实时定量PCR (real-time PCR)技术检测心脏组织中NOMO1基因mRNA的表达丰度,并应用荧光原位杂交(FISH)的方法对其进行定位分析.结果:在妊娠D12、D15、D16、D17、D19、D21的胚胎心脏中NOMO1基因mRNA均有表达,且呈由弱到强再减弱趋势,表达高峰出现在D16;该基因主要表达于心外膜中,而在心肌层、心内膜、心瓣膜等处未见表达.结论:NOMO1基因的表达随大鼠胚胎的心脏发育呈动态表达,可能与心脏发育相关.
-
小鼠NOMO1基因RNA干扰载体的构建及其功能的初步研究
目的:构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,比较其对P19细胞NOMO1基因的抑制效率,以研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系.方法:利用Designer3.0软件设计小鼠NOMO1基因干扰片段,合成shRNA序列,再行寡核苷酸双链的合成,退火后形成的寡核苷酸双链克隆到pGPU6/Hygro载体的黏性末端,连接产物转化到感受态细胞,增菌,质粒扩增,质粒DNA抽提,使用Pst Ⅰ、BamH Ⅰ进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆.将小鼠NOMO1基因RNA干扰载体转染P19细胞,以RT-PCR技术验证NOMO1基因在P19细胞中的mRNA表达.以DMSO诱导分化方案诱导P19细胞向心肌细胞分化,采用定量RT-PCR技术检测P19细胞中α-MHC等基因mRNA的表达,评估NOMO1与P19于细胞向心肌细胞方向分化的关系.结果:双酶切证实shRNA正确插入质粒,测序结果表明插入的序列正确.载体转染的P19细胞筛选稳定表达株,经RTPCR和Western blot验证4个位点设计的干扰质粒对NOMO1在P19细胞中的mRNA表达均具有较高的抑制效率.转染后P19细胞的α-MHC基因mRNA表达则显著下调(P＜0.05).结论:成功构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,为研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系提供了稳定的转染细胞工具,NOMO1可能通过诱导α-MHC等基因表达,促进P19干细胞向中胚层的分化.
