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Tet-off/Tet-on基因工程鼠中脑肿瘤干细胞的克隆与鉴定
目的:从Tet-off/Tet-on转基因脑肿瘤小鼠模型中分离鉴定脑肿瘤干细胞,为进一步研究其是否起源于神经干细胞奠定基础.方法:从出现临床症状的转基因小鼠天幕区肉眼可见的肿瘤组织中取材,一部分做冰冻切片:另一部分制成单细胞悬液,培养于含生长因子的无血清培养基和含血清培养基.在光镜下观察常规病理,用相差显微镜和电镜分别观察细胞形态及其超微结构,用流式细胞仪检测Hoechst33342阴性的SP细胞,以及其染色体倍体和细胞周期,免疫荧光染色检测细胞球体及其分化细胞中的神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、glial fibrillary acidic protein(GFAP)表达情况.结果:肿瘤位置均位于小脑天幕上下约2～3mm的松果体区域内,常规病理诊断为髓母细胞瘤.肿瘤细胞在无血清培养条件下,呈悬浮的球状生长,在含血清培养条件下贴壁分化成瘤性胶质细胞、神经元.电镜见到了核质比高、细胞器不发达、具干细胞特征的细胞.流式细胞仪检测肿瘤细胞球中的SP(side population)细胞为17.27%,异倍体细胞为26.77%.免疫荧光染色发现细胞球中大部分细胞表达干细胞标志物Nestin,少数细胞表达分化标志物GFAP和NSE.与之相反,贴壁细胞大部分表达分化标志物微管相关蛋白2(MAP2)或胶质纤维酸性蛋白(GFAP),同时共表达干细胞标志物Nestin.结论:Tet-off/Tet-on转基因小鼠脑肿瘤组织中存在具有自我更新和多向分化潜能的脑肿瘤干细胞.
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转基因脑肿瘤小鼠模型中成体神经干细胞与脑肿瘤干细胞的克隆与鉴定
目的 从Tet-on转基因脑肿瘤小鼠模犁中分离鉴定成体神经干细胞和脑肿瘤干细胞.方法 分别从转基因小鼠肿瘤和室管膜下区取材,将细胞培养于含生长因子的无或含血清培养基.光镜下观察病理,相差显微镜和电镜下分别观察细胞形态及超微结构,流式细胞术榆测Hoechst33342阴性的SP细胞、染色体倍体和细胞周期,免疫荧光染色检测细胞球体及分化细胞表面标志物.结果 无血清培养条件下,肿瘤细胞和室管膜下区细胞均呈悬浮球状生长,含血清培养条件下贴壁分化.成体神经干细胞球细胞较小,形态相对较规则.电镜下两者均表现核质比高、细胞器不发达、具干细胞特征,但存细胞器发育上有所差异.肿瘤细胞球中异倍体细胞为26.77%.而神经球中细胞均为二倍体.免疫荧光染色两种细胞球中大部分细胞表达干细胞标志物Nestin,少数细胞表达分化标志物GFAP和NSE.贴壁后两者的大部分细胞表达分化标志物,且部分细胞共表达前体细胞标志.结论 Tet-on转基因脑肿瘤小鼠中存在具有自我更新和多向分化潜能的脑肿瘤干细胞和神经干细胞.
