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高密度脂蛋白通过Akt信号通路对氧糖剥离小鼠心肌细胞的保护作用研究
目的 探讨高密度脂蛋白(HDL)对氧糖剥离(OGD)小鼠心肌细胞的保护作用.方法 通过蛋白酶消化及差速贴壁法获得原代清道夫受体B1基因敲除小鼠(SR-B1-/-)的心肌细胞与普通C57小鼠(SR-B1+/+)的心肌细胞.① 将两种细胞均分为正常对照组(Con组)、OGD组、OGD+HDL组3组,培养4 h后用碘化丙啶(PI)染色测定细胞坏死情况.② 将SR-B1+/+心肌细胞分为Con组、OGD组、OGD+HDL组、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)抑制剂LY294002组4组,用PI染色测定细胞坏死情况;用原位末端缺刻标记法(TUNEL)测定细胞凋亡情况;按照试剂盒步骤测定细胞上清液中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定SR-B1、Akt蛋白表达.结果 ① 在SR-B1+/+心肌细胞中,给予HDL可抑制OGD致细胞坏死;而HDL对OGD的SR-B1-/-心肌细胞无保护作用.② 对SR-B1+/+细胞研究显示:与Con组比较,OGD组坏死细胞显著增多,细胞活性显著下降,上清液中LDH、CK-MB含量升高,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、SR-B1表达显著下降.与OGD组比较,OGD+HDL组坏死细胞显著减少〔PI阳性细胞率:(26.71±5.94)％比(64.24±18.34)％〕,细胞活性显著升高〔(63.84±6.95)％比(26.71±5.13)％〕,上清液中LDH、CK-MB含量显著下降〔LDH(U/L):896.3±161.5比1568.3±243.5,CK-MB(U/L):304.3±72.9比583.6±81.6〕,p-Akt、SR-B1表达显著升高(p-Akt/t-Akt:0.84±0.13比0.18±0.06,SR-B1/β-actin:1.23±0.19比0.09±0.02),差异均有统计学意义(均P<0.05).与OGD+HDL组比较,LY294002组坏死细胞增多,细胞活性下降,上清液中LDH、CK-MB含量升高,p-Akt、SR-B1表达下降,且各指标与OGD组比较差异均无统计学意义.4组间细胞凋亡情况差异无统计学意义.结论 HDL对OGD小鼠心肌细胞具有保护作用,其机制可能与激活PI3K/Akt通路后上调SR-B1蛋白表达相关.
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小凹蛋白-1和清道夫受体-B1与动脉粥样硬化关系研究进展
脂质紊乱和炎症反应在动脉粥样硬化的发生发展中发挥了重要的作用.其中胆固醇的逆向转运能力是决定动脉粥样硬化进程与转归的关键.目前还存在一类对动脉硬化的形成有特殊作用的蛋白,即血清逆转运蛋白.这类蛋白主要包括小凹蛋白和清道夫受体家族.小凹蛋白-1(CAV-1)既在载脂细胞胆固醇流出中发挥转运中心和关键分子的作用,也在炎症反应中发挥介导抗炎的信号转导作用.清道夫受体-B1(SR-B1)存在细胞膜上,能够促进胆固醇的逆向转运,清除血及组织中过多的胆固醇,SR-B1同时参与低密度脂蛋白及极低密度脂蛋白的代谢,具有抗动脉粥样硬化的作用.因此,CAV-1和SR-B1可能是载脂细胞胆固醇逆向转运和炎症应答的共同分子平台.笔者将此类本文就此类蛋白在动脉粥样硬化形成中的作用综述如下.
