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GDF-5基因体外转染骨髓间充质干细胞移植与GAM体内转染对椎间盘退行性变作用的动物实验研究
目的 通过对比体外生长分化因子5(GDF-5)转染并移植和基因活化基质(GAM)体内转染对椎间盘退行性变的修复作用,评价这两种方法的差异,以期为临床应用提供依据.方法 日本大耳白兔32只,体质量约1.5～ 2.0 kg,雌雄不限.取兔骨髓,分离骨髓间充质干细胞(BMSC),用脂质体介导的pcDNA3.1 (+)/GDF-5基因重组质粒转染BMSC.将兔随机分为A组(正常组)、B组(转染细胞组)、C组(GAM组)、D组(对照组).B、C、D组从L1-2、L2-3、L3-4、L4-5抽吸约湿质量5mg的髓核组织,制作椎间盘退行性变动物模型;B组植入已转染GDF-5的BMSC,C组植入GDF-5 GAM,D组植入空白培养液.术后2个月将包括软骨终板在内的各组完整的椎间盘取出,采用间苯三酚法测量椎间盘髓核中蛋白多糖含量,采用流式细胞仪检测分析髓核细胞凋亡率.结果 转染48h后BMSC生长良好,体积略增大.经测定pcDNA3.1 (+)/GDF-5基因转染成功后髓核内蛋白多糖含量,B组(0.2169±0.0264)与A组(0.240 1±0.0300)间差异无统计学意义(P=0.149);其余组(C组、D组分别为0.1667±0.027 8、0.1153±0.033 7)两两比较,差异都有显著的统计学意义(P＜0.01).髓核细胞凋亡率,A组(24.55％±2.681％)与B组(30.980％±2.462％)间差异具有统计学意义(P=0.012),其余各组(C组、D组分别为38.220％±2.524％、57.530％±2.349％)两两相比,差异都有显著统计学意义(P＜0.01).结论 相对于利用GAM进行体内转染,体外转染BMSC然后再移植入体内的方法修复椎间盘退行性变的效率更高.
