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洋金花有效部位及其组分对二甲基亚砜损伤的中国仓鼠卵巢细胞的保护作用
目的 观察洋金花不同提取物(有效部位、醉茄甾内酯组分和黄酮组分)对二甲基亚砜(DMSO)损伤的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的保护作用.方法 常规传代培养CHO细胞,采用噻唑蓝(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)法测定细胞活性.结果 3%DMSO与CHO细胞共同孵育24 h后,经MTT法检测细胞存活率明显下降.洋金花有效部位(10～80μg/mL)剂量依赖性增加细胞活性;洋金花醉茄甾内酯组分(30～120μg/mL)对DMSO的细胞损伤作用无明显影响,而洋金花黄酮组分(2.5～20μg/mL)呈剂量依赖性减轻DMSO对细胞的损伤作用.4.5%DMSO与CHO细胞共同孵育24 h后,细胞LDH的漏出率明显增加.洋金花有效部位(10～80μg/mL)、洋金花醉茄甾内酯组分(30～120 μg/mL)和洋金花黄酮组分(2.5～20μg/mL)均不能降低细胞LDH的漏出率.结论 洋金花中的黄酮组分可以减轻DMSO的细胞毒性,此种药理作用可能与改善细胞线粒体的功能有关,而对细胞膜的损伤无明显保护作用.
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人白细胞介素10基因克隆及真核表达
目的建立人白细胞介素-10(hIL-10)真核表达系统并观察其在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达.方法用RT-PCR方法自活化的人外周血淋巴细胞扩增hIL-10 cDNA,将其克隆至pMD18-T中,测序正确后,再定向插入至真核表达载体pCIneo中,经脂质体介导转染CHO细胞,检测其在细胞内外的表达和分泌并进行活性检测.结果RT-PCR扩增的hIL-10 cDNA序列与GenBank中hIL-10cDNA序列一致;构建了真核重组表达载体pCIneo-hIL-10;转染CHO细胞后可检测到具生物活性的hIL-10的转录和表达.结论成功构建了hIL-10真核表达系统,为今后的临床研究及基因工程药物生产打下基础.
关键词： 白细胞介素10 克隆 真核表达 中国仓鼠卵巢(CHO)细胞 -
CHO-S高产量细胞株的新型构建方法及其评价
中国仓鼠卵巢(CHO)细胞是工业生产重组蛋白类生物药物的主要宿主细胞之一.重组蛋白工程细胞株的传统构建方法是通过外源基因的随机整合和多步骤的加压筛选获得,这种方法耗时费力.本研究主要介绍了一种新型的悬浮类型CHO细胞(CHO-S)高产细胞株的构建方法,利用Crispr/Cas9介导的定点整合技术,将重组蛋白编码基因快速、准确地整合到CHO-S细胞基因组中的转录活跃区,实现重组蛋白的高产量表达.采用本方法成功构建得到了高表达单克隆抗体细胞株,并验证了细胞产物质量一致性.
