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体外染镉对大鼠卵巢孕激素合成的影响及其机制
目的 研究镉对孕激素合成过程中类同醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)基因表达的影响及其与环磷腺苷(cAMP)的关系,为研究镉对孕激素合成影响的分子机制提供科学依据.方法 未成年Wistar大鼠皮下注射孕马血清促性腺激(PMSG)100U,48 h后取出卵巢颗粒细胞体外培养,备用.(1)取备用细胞随机分成4组,染镉剂量分别为0、10、20、40μmol/L,孵化30 min后,放射免疫方法测黄体酮、cAMP含量,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 测P450scc、StAR的mRNA表达水平.(2)再取备用细胞随机分为3组,分别为空白对照组、40μmol/L CdCl_2、l mmol/L 8-Br-cAMP(cAMP类似物)+40 μmol/L,CdCl_2,培养2 h后,测黄体酮含量及P450scc、StAR的mRNA表达水平.结果 (1)不同剂量染镉组卵巢颗粒细胞孵育液中黄体酮含量明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);随着染镉剂量的增加,cAMP含量逐渐减少;各染镉剂量组StARmRNA和P450scc mRNA表达强度均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).(2)加入1 mmol/L 8-Br-cAMP共同培养后,黄体酮含量增加,高于染镉(40 μmol/L)组和对照组.差异均有统计学意义(P<0.01);StAR mRNA和P450scc mRNA表达强度均高于40μmol/L染镉组,低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 镉可通过直接和(或)间接途径影响孕激素合成过程StAR和P450scc的表达,进而干扰孕激素的合成;镉对细胞内cAMP的影响可能是其干扰StAR和P450scc基因表达的机制之一.
