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尿中N-乙酰-S-(2-氨基甲酰乙基)-半胱氨酸测定的高效液相色谱法
目的 建立尿中N-乙酰-S-(2-氨基甲酰乙基)-半胱氨酸(AAMA)的高效液相色谱测定方法.方法 样品经酸水解后,尿中AAMA生成S-2-羧乙基半胱氨酸,S-2-羧乙基半胱氨酸与邻苯二甲醛衍生试剂反应生成强荧光吸收的衍生物,用高效液相色谱-荧光检测器测定,荧光激发波长为340 nm,发射波长为450 nm.结果 尿中AAMA浓度在5.3～132.5 μmol/L线性关系良好,相关系数为0.999 4,低检出浓度为0.1 μmol/L(取尿样1.00 ml),加标回收率为97.4％～104.2％,批间精密度为2.3％～4.3％,样品可在4℃冰箱中至少保存7d.结论 该方法操作简单,成本低,灵敏度高,具有较好的精密度和准确度;采用实验室比较常见的仪器设备,利于推广应用.
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在线衍生-高效液相色谱法测定尿中N-乙酰-S-(2-氨基甲酰乙基)-半胱氨酸
目的 建立尿样中N-乙酰-S- (2-氨基甲酰乙基) -半胱氨酸的在线衍生-高效液相色谱测定方法.方法 尿样中N-乙酰-S- (2-氨基甲酰乙基) -半胱氨酸经酸水解成S-2-羧乙基半胱氨酸,经碱中和后,在高效液相色谱仪自动进样器中使用邻苯二甲醛自动衍生,生成荧光衍生物,经C18色谱柱分离,用荧光检测器在发射波长为340 nm,激发波长为450 nm下测定荧光强度;通过实验比较不同的衍生剂浓度及用量,选择佳的衍生化条件.结果 本法在5.3μmol/L～79.5μmol/L线性相关系数为0.999 2,低检出浓度为2.12μmol/L (1 ml尿样),批内精密度为6.27％～8.70％,批间精密度为3.63％～8.26％;加标回收率为97.65％～99.06％,初步发现吸烟者尿液中AAMA平均含量明显高于非吸烟者的平均含量.结论 该方法操作简单,自动化程度高,灵敏,准确,精密度高,可用于尿中N-乙酰-S- (2-氨基甲酰乙基) -半胱氨酸的测定.
