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硝酸菌norB基因的克隆及序列分析
目的扩增、克隆硝酸菌的norB基因.方法通过PCR扩增硝酸菌的norB基因,然后克隆至T载体中,并转化进E.coli JM109中.通过兰白斑挑选阳性转化子.对质粒测序,并与Genbank上的序列进行同源性分析.结果同源性搜索发现所有扩增到的基因无论在核酸序列水平还是在蛋白序列水平都与Genbank上的汉堡硝化杆菌norB基因同源,且同源性高达96%~98%.结论扩增获得的基因经过基因序列分析证实为硝酸菌norB基因.
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几株硝化菌的筛选及其初步鉴定
目的:筛选、分离能够用于治理氨氮污染和军事坑道生活污物、污水的硝化菌.方法:通过富集培养从土壤中筛选的硝化菌,在进行形态学检验和硝化速率测定后,设计引物扩增硝化菌的特征性基因NorB,随机选择一个PCR产物进行测序,并与Genbank上的序列比较同源性.结果:筛选到7株能够降解亚硝酸盐的细菌,经革兰氏染色后发现全部为阴性,其菌落形态以小、圆、淡黄色为主,细菌形态多为短杆状;各菌株的硝化速率在4.35~4.80(mg@L-1@d-1)之间.用PCR均能扩增出预期大小片段.对其中的某一个PCR产物直接测序,与Genbank中的序列比较,发现该基因与硝化菌N.hamburgensis的Norb基因同源性高达99%.结论:可以初步断定,我们所筛选到的菌为硝化菌.