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叠氮溴乙啶-定量PCR文献资料
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公共场所空气中存活嗜肺军团菌叠氮溴乙啶-定量PCR检测的初步研究
目的 建立叠氮溴乙啶(ethidium monoazide bromide,EMA)与定量PCR(qPCR)相结合检测公共场所空气中存活的嗜肺军团菌的方法.方法 用培养的嗜肺军团菌进行实验以得到EMA处理的适条件;采集嗜肺军团菌气溶胶模拟样品,采用EMA-qPCR(EMA处理组)和qPCR(对照组)验证其检测活菌的效果;并将该方法在公共场所进行现场应用实验.结果 EMA终浓度在2.5 μg/ml、4℃孵育5 min、光照5 min的处理条件下,可在基本不影响活菌PCR扩增的情况下使死菌qPCR的信号降低约2 lg,即可以抑制99％的死菌PCR扩增.当死菌和活菌的浓度比例不超过1 000∶1时,EMA-qPCR方法可实现对空气中存活嗜肺军团菌的定量检测.采集的公共场所气溶胶样品中,EMA处理组和对照组的嗜肺军团菌阳性率分别为37.5％(15/40)和57.5％(23/40);在两组检测结果均为阳性的10对样品中,1对样品的检测结果相同,5对样品EMA处理组检测结果低于对照组,平均低0.70 lg copies/ml,4对样品EMA处理组的检测结果高于对照组,平均高0.65 lg copies/ml.结论 EMA-qPCR方法可用于公共场所空气中嗜肺军团菌活菌的快速定量检测.
关键词： 叠氮溴乙啶-定量PCR 嗜肺军团菌 公共建筑 气溶胶
