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腺苷A2A受体激活抑制低氧性肺动脉平滑肌细胞增殖的机制
目的 研究腺苷A2A受体(adenosine A2A receptor,A2AR)激活对低氧肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖的影响及其作用机制.方法 体外培养SD大鼠PASMCs,经免疫组化鉴定,离体培养分7组:①正常对照组(control group)；②低氧组(chronic hypoxia,CH)；③CH+线粒体敏感性钾通道(MitoKArP)开放剂diazoxide组；④CH+MitoKATP阻断剂5-HD组；⑤CH+A2AAR特异性激动剂CGS21680组；⑥CH+CGS21680+diazoxide组；⑦CH+CGS21680 +5-HD组.CCK-8染色法检测CGS21680对离体大鼠PASMCs增殖的影响,实时荧光定量法检测CGS-21680对大鼠PASMCs腺苷A2A受体基因表达的影响.结果 低氧使CCk-8吸光度(absorbance,A)值升高(P＜0.01),CGS-21680干预使低氧下A值明显下降,且CGS-21680和5-HD协同作用下效果更明显.Real-time RT PCR显示低氧和CGS-21680干预组A2A AR表达显著升高(P＜0.01),且以CGS-21680联合5-HD组升高明显.结论 A2AAR激活剂CGS-21680抑制低氧PASMCs增殖,可能与阻断MitoKATP通道开放有关.
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Urocortin I后处理对缺氧/复氧大鼠心肌细胞线粒体膜电位及活性氧自由基的影响
目的 观察Urocortin I后处理对缺氧/复氧大鼠心肌细胞线粒体膜电位及活性氧自由基的影响.方法 利用ALC-HP型离体心脏灌注装置分离成年大鼠心肌细胞,将培养1d后存活状态良好的细胞随机分为正常组(N组)、缺氧/复氧组(HR组)、UrocortinⅠ后处理组(Ucn I组)、5-羟葵酸拮抗Urocortin Ⅰ组(5-HD+UcnⅠ组).N组:37 ℃培养箱中持续培养150 min;HR组:缺氧40 min后,复氧110 min;Ucn Ⅰ组:缺氧40 min复氧10 min,然后Ucn Ⅰ处理30 min再复氧70min;5-HD+Ucn Ⅰ组:特异性线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)拮抗剂5-HD处理10 min后,在含Ucn Ⅰ的培养基中处理30 min,余处理同Ucn Ⅰ组.各组于复氧末加入荧光探针并用倒置相差显微镜观察细胞线粒体膜电位(MMP)及活性氧自由基(ROS)的变化.结果 ①MMP变化:N组心肌细胞MMP较其余各组高(P<0.01);Ucn I组虽低于N组,但高于HR组及5-HD+Ucn I组(P<0.05);5-HD+Ucn I组与HR组比差异无统计学意义(P>0.05).②ROS变化:N组心肌细胞ROS荧光强度低于其余各组(P<0.01);Ucn I组及5-HD+Ucn I组较HR组低(P<0.01),但5-HD+Ucn I组高于Ucn I组(P<0.01).结论 Urocortin I后处理能抑制缺氧/复氧心肌细胞活性氧自由基的生成,并抑制线粒体膜电位的衰减,其机制与其开放线粒体ATP敏感性钾通道有关.
