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RHBDD1文献资料
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应用改良体细胞基因敲入技术内源标记跨膜丝氨酸蛋白酶RHBDD1的研究
目的 应用改良的体细胞基因敲入技术将标签序列靶向敲入目的基因.方法 设计引物并构建RHBDD1的打靶载体,经过腺相关病毒包装、感染、新霉素筛选和鉴定等步骤获得含有新霉素抗性的阳性单克隆细胞株,后通过cre病毒感染和筛选获得RHBDD1内源敲入FLAG和SBP双标签的HCT116结直肠癌细胞株.结果 经过包装病毒感染与筛选验证后得到6个打靶阳性克隆；进一步经cre病毒感染与筛选后得到2株去除新霉素抗性标记的阳性细胞克隆；通过Western blotting实验证明RHBDD1 - FLAG - SBP融合蛋白的表达.结论 通过改良的体细胞基因敲入技术成功构建跨膜丝氨酸蛋白酶RHBDD1内源敲入FLAG和SBP双标签的HCT116结直肠癌细胞株.
