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人肝星状细胞系文献资料
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人脂联素真核表达质粒构建及其在LX-2中的表达
目的 构建人全长脂联素真核表达质粒,转染人肝星状细胞系(LX-2),观察其表达及分泌情况,为脂联素在肝纤维化作用的基础及临床研究提供实验数据.方法 提取人脂肪组织mRNA,用RT-PCR扩增出添加酶切位点的人全长脂联素基因片段,双酶切扩增出的目的 基因片段及空载体质粒P7,将酶切后的片段进行连接、转化构建质粒.用FuGENE HD将构建成功的质粒转染LX-2细胞,用免疫荧光观察其转染效率及细胞定位,Western blotting检测脂联素蛋白表达.结果 酶切及测序证实成功构建人全长脂联素真核表达质粒,免疫荧光检测转染效率约为40%,Western blotting检测到30 000处存在目的 蛋白表达,与预期相对分子质量一致.结论 成功构建的人全长脂联素真核表达质粒能有效转染LX-2细胞及表达脂联素蛋白.
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miRNA-27b对人星状细胞系脂代谢与迁移能力的影响
目的 探讨在人肝星状细胞系中miR-27b基因表达异常对LX-2细胞的脂滴沉积与迁移能力的影响.方法 转染干预miR-27b的表达,油红染色与划痕实验检测LX-2细胞的脂滴沉积与迁移能力,荧光定量PCR检测靶基因RXRa的表达.结果 miR-27b在人肝星状细胞系LX-2细胞活化过程中表达升高,miR-27b的模拟物可以促进LX-2细胞的迁移、减小胞质内脂滴沉积;相反,miR-27b抑制物可以减弱LX-2细胞的迁移,增加胞质内脂滴沉积.荧光定量PCR结果显示RXRa在转染miR-27b模拟物表达降低,抑制物无明显变化.结论 上调miR-27b的表达可能是通过靶基因RXRa促进LX-2细胞的迁移,减少细胞胞质内的脂滴沉积.
