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地高辛文献资料
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提高抗地高辛人单链抗体在大肠杆菌分泌型表达的研究
目的:提高从半合成噬菌体抗体库中克隆的抗地高辛(Dig) 人单链抗体(ADA scFv)在大肠杆菌(E.coli)的分泌表达水平.方法:①通过PCR从表达质粒pHEN2-ADA scFv扩增ADA scFv基因并重组于质粒p3MH构建表达质粒p3MH-ADA scFv后,转化到E.coli XL1-blue及HB2151; ②ADA scFv分别在带有上述2种表达质粒的E.coli HB2151 以及带有表达质粒p3MH-ADA scFv的E.coli XL1-blue进行表达,通过ELISA分析培养基上清中的可溶性ADA scFv;③在培养基中加入蔗糖、甘氨酸及Triton X-100,通过ELISA分析培养基上清中的可溶性ADA scFv.结果:①ADA scFv 在含表达质粒p3MH-ADA scFv的E.coli HB2151 及XL1-blue的分泌型表达水平比pHEN2-E.coli HB2151 表达系统高约 5 倍;②在培养基中加入蔗糖,可使ADA scFv 在含有表达质粒p3MH-ADA scFv的E.coli HB2151 及XL1-blue表达系统的分泌型表达提高 5 倍多.结论:通过采用不同的载体-E.coli表达系统以及在培养基中加入不被代谢的蔗糖,可使ADA scFv的分泌型表达提高 25 倍多.
