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Tet-On基因☆文献资料
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Tet-On基因表达系统定量调节荧光素酶基因在CHO细胞中的表达
目的:应用Tet-On基因表达系统建立CHO-Tet-On细胞株,通过强力霉素(Dox)调节荧光素酶基因的表达.方法:pTet-On质粒转染CHO细胞株,经 G418筛选,得到稳定表达株CHO-Tet-On.pTRE-Luc质粒瞬时转染CHO-Tet-On 克隆1至30,培养基中加入2 mg*L-1 Dox或不加Dox,培养72 h后检测荧光素酶活性.结果:克隆18、28、29当培养基中加入Dox(即"On"状态)时荧光素酶活性高,当培养基中不加Dox(即"Off"状态)时荧光素酶活性低,故选择克隆18、28、29作为高表达、低背景的CHO-Tet-On细胞株.结论:CHO-Tet-On细胞株的建立,可利用四环素及其衍生物调节多种外源基因的表达,有效调控基因表达的时间和水平,定量诱导毒性蛋白的表达,增加治疗的疗效和安全性,有望为基因治疗提供一条可控的安全途径.
