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荧光定量PCR法研究重组病毒巨噬细胞炎症蛋白联合用药体外抗HIV-1的作用
目的 建立荧光定量PCR技术测定HIV-1病毒载量的方法,并用于研究重组病毒巨噬细胞炎症蛋白(rvMIP)联合用药前后的病毒载量变化.方法 选择HIV-1的gag和env保守区域设计引物,建立荧光定量PCR测定HIV-1病毒载量的体系.分别设置rvMIP、AZT、T-20、rvMIP+AZT、rvMIP+T-20 5个不同用药组,运用荧光定量PCR法检测用药后各组病毒载量的变化.结果 所建立的荧光定量PCR体系的检测下限为101拷贝,其标准曲线的相关系数为0.997 4,斜率为-2.524,截距为29.716;除了浓度6 ng·mL-1的rvMIP组、AZT组、T-20组外,各用药组病毒载量值与阳性对照均有差别,且随药物浓度增加,病毒载量逐渐减小.各相同浓度用药组病毒栽量相比.rvMIP+T-20组＜rvMIP+AZT组＜rvMIP组＜T-20组＜AZT组.结论 所建立的荧光定量PCR检测体系可靠;rvMIP与T-20或AZT联用可以增强rvMIP对HIV-1病毒的抑制作用.
关键词： 荧光定量PCR 重组病毒巨噬细胞炎症蛋白 HIV-1病毒载量 -
SYBR Green I荧光定量PCR检测HIV-1前病毒方法的建立及应用
目的 建立SYBR Green I荧光定量PCR技术测定HIV-1前病毒载量方法,并以其观察相关病毒进入抑制剂对HIV-1前病毒的作用.方法 选择HIV-1的gag和env保守区域设计引物,建立SYBR Green I荧光定量PCR测定HIV-1前病毒载量的体系,并以其观察6 μg/ml～6 ng/ml的重组病毒巨噬细胞炎症蛋白(rvMIP)、逆转录酶抑制剂(AZT)、膜融合抑制剂(T-20)、rvMIP+AZT、rvMIP+T-20对HIV-1前病毒载量的影响.结果 所建立的荧光定量PCR体系的检测下限为101 Copies,其标准曲线的相关系数为0.998 9,斜率为-4.925,截距为35.70;除6 ng/ml的 rvMIP、AZT、T-20外,三种药物处理后HIV-1前病毒载量均显著减小(P<0.05),并呈质量浓度依赖性;联合用药者前病毒载量显著低于单用rvMIP者(P<0.05),HIV-1前病毒载量rvMIP+T-20
