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人乳腺珠蛋白单克隆抗体修饰的免疫磁性纳米粒的制备和表征
目的 制备粒径均一、超顺磁性强、性质稳定、免疫活性强并可识别乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞的免疫磁性纳米粒(immunomagnetic nanoparticles,IMNP).方法 多元醇法合成含有活性羧基基团的超顺磁氧化铁纳米粒(superparamagnetic oxide iron nanoparticles containing reactive carboxyl groups,SMNP-COOH),热重分析法测定SMNP-COOH表面羧基含量,邻二氮菲测定铁含量.在1-甲基-3-乙基碳二亚胺(EDC),N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化下,采用碳二亚胺偶联法将鼠抗人乳腺珠蛋白(anti human mammaglobin,anti-hMAM)单克隆抗体共价修饰结合至SMNP-COOH表面合成IMNP.透射电镜(transmission electron microscope,TEM)、X射线衍射仪(X-ray powder diffraction XRD)、振动样品磁强计(vibrating sample magnetometer,VSM)、激光散射粒径电位测定仪和邻二氮菲法测定铁含量等方法分别对SMNP-COOH和IMNP进行表征,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定IMNP表面抗体活力.结果 X-射线粉末衍射检测表明,SMNP-COOH和IMNP两者特征峰与标准Fe3O4的特征峰一致.SMNP-COOH和IMNP的铁含量分别0.205和0.164 mol·L-1;透射电镜检查提示,SMNP-COOH和IMNP均呈球形或椭球形,透射电镜测定粒径为(13.7±3.6)和(15.4±4.5)nm;流体粒径测定结果表明,SMNP-COOH和IMNP强均粒径和多分散系数分别为23.4,71.2 nm,0.303和0.175;磁学性能研究表明,SMNP-COOH和IMNP均具有超顺磁性,抗体结合可以降低SMNP-COOH的磁性,两者质量饱和磁化强度分别为71.37和67.68 emu·g-1 Fe.ELISA法测定IMNP表面的抗体活力表明,IMNP表面结合的抗体量为93 μg·mg-1 IMNP.抗-hMAM抗体修饰的IMNP能与乳腺癌细胞株MDA-MB-415具有强的选择性和特异性.结论 成功合成超顺磁性强,能与乳腺癌细胞株发生特异性结合的免疫磁性纳米粒,可用于免疫磁性分离富集乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTCs),从而为乳腺癌CTCs的特异性检测提供更有利的武器.
