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牛气管抗菌肽文献资料
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牛气管抗菌肽cDNA的克隆与表达
目的:开发一种有效抑制动物细菌感染的重组抗菌肽.方法:根据已发表的牛气管抗菌肽(bTAP)mRNA序列设计引物,用RT-PCR从奶牛气管上皮细胞总RNA中扩增出214bp的bTAP cDNA,将其克隆入pUCm-T载体进行序列测定,将此cDNA分别克隆入真核表达载体pcDNA3和原核表达载体pGEX-6p-1进行表达研究.结果:测序结果与已发表的bTAP序列有3个碱基差异,其中2个导致氨基酸替换;经微球菌溶解试验证明,注射在小鼠皮下的重组质粒pcDNA-tap能表达有活性的bTAP;抗体测定结果显示重组质粒pcDNA-tap经5次免疫后家兔产生的抗bTAP抗体效价达1∶800;经IPTG诱导后,含重组质粒pGEX-tap大肠杆菌能表达预计大小的GST-bTAP融合蛋白,且能被兔抗bTAP识别.结论:本研究克隆的bTAP cDNA可用于表达研究及相关基因工程产品的开发.
