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心肌转录因子和锌指转录因子在先天性心脏病中的相互作用
目的 研究心脏发育相关基因心肌转录因子NKX2.5和锌指转录因子GA TA4在先天性心脏病(CHD)的相互作用关系.方法 构建基因NKX2.5和GA TA4真核表达质粒及脑钠肽启动子荧光素酶报告基因表达质粒,真核表达质粒经转染后,利用免疫共沉淀技术证明基因NKX2.5和GATA4两者是否有相互作用,通过荧光素酶分析技术分析基因NKX2.5和GATA4对脑钠肽启动子序是否存在协同激活作用.结果 pCMV-HA-NKX2.5与Pre-immune 作用后蛋白表达量0,与Anti-Myc作用后蛋白表达量为3.63±1.23,与Input作用后蛋白表达量为2.95±1.05,NKX2.5可将GATA4沉淀下来;pCMV-Myc-GATA4与Pre-immune作用后蛋白表达量0,与Anti-Myc作用后蛋白表达量为5.63±2.06,与Input作用后蛋白表达量为5.75±2.86,GATA4可将NKX2.5沉淀下来;脑钠肽(BNP)启动子荧光表达质粒与两者共转染比分别单独转染NKX2,5和GATA4对脑钠肽启动子的激活作用更强.结论 NKX2.5和GATA4之间具有相互作用,在心脏发育过程中起着重要的协同作用.
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心脏发育相关基因NKX2.5和GATA4突变与先天性心脏病的相关性
目的 观察心脏发育相关基因NKX2.5和GATA4突变与先天性心脏病之间的相关性.方法 纳入214例先天性心脏病患儿,并入选186例健康儿童作为对照组,用脱氧核糖核酸聚合酶链反应(PCR-DNA)测序技术对先天性心脏病患儿外周血中NKX2.5和GATA4基因的外显子及其侧翼序列进行分析.测序完成后,对NKX2.5的2个外显子和GATA4的6个外显子进行聚合酶链反应(PCR)扩增测序,将结果与GeneBank中公布的DNA标准序列进行对比,观察是否发生突变.结果 NKX2.5测序发现,72例患儿位于21位氨基酸的第3位碱基发生同义突变(c.63A＞G,E21E),8例患儿的94位氨基酸的第3位碱基发生同义突变(c.282A/C,P94P),以上突变基因均位于外显子1;48例患儿的246位氨基酸的第3位碱基均发生突变(T→A,c.738A/T,N246K),位于外显子2的第一部分;8例患儿的2个杂合发生同义突变[(c.769C/G,P257P)和(c.780C/A,G260G)],位于外显子2的第二部分.GATA4测序发现,8例患儿的第744位碱基发生杂合同义突变(c.744C ＞T,N248N),位于外显子3.结论 在先天性心脏病患儿中,NKX2.5外显子发现了5个突变位点,GATA4发现了1个突变位点,这些单核苷酸多态性与先心病可能存在着相关性.
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姜黄素干预乙醇对心肌祖细胞H3K9的高乙酰化失衡及心脏发育相关基因表达异常
目的:探讨乙醇对心肌祖细胞毒性作用的表观遗传机制.方法:以心肌祖细胞株为研究对象,用200 mmol/L乙醇和溶解于该浓度乙醇的不同浓度姜黄素(5 μmol/L,15 μmol/L,25 μmol/L)处理.Western blot检测组蛋白H3K9乙酰化水平,筛选出姜黄素的有效干预浓度,实时定量PCR检测心脏发育相关基因GATA4,Mef2c,Tbx5 mRNA表达量的变化.结果:200 mmol/L乙醇使组蛋白H3K9乙酰化水平升高2.76倍(P<0.05),同时使心脏发育相关基因GATA4,Mef2c,Tbx5表达均增加,其中GATA4,Mef2c较对照组有统计学差异(P<0.05).5 μmol/L、15 μmol/L姜黄素分别使组蛋白H3K9乙酰化水平升高2.22、1.58倍(P<0.05);25 μmol/L姜黄素使组蛋白H3K9乙酰化水平降至对照组水平,同时使心脏发育相关基因GATA4,Mef2c,Tbx5表达较乙醇组均下降,且与对照组无差异(P>0.05).结论:姜黄素可干预乙醇对心肌祖细胞的高乙酰化失衡以及进而发生的相关基因的表达异常,可为了解乙醇致畸的机制以及临床预防先天性心脏病提供新的思路.
