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Heparosan细胞入胞途径及其胞内分布
本文对肝素前体(heparosan)的细胞摄取途径及其进入细胞后的分布情况进行了研究.通过胞吞途径抑制及细胞探针定位实验发现,MCF-7肿瘤细胞较COS7正常细胞对heparosan的摄取效率更高,具有选择性.Heparosan在MCF-7肿瘤细胞和COS7正常细胞中的内吞过程均为能量依赖.Heparosan主要通过小窝蛋白和巨胞饮介导的内吞进入MCF-7肿瘤细胞,并且主要分布于溶酶体中.
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乙酰氨基葡萄糖转移酶KfiA的共表达与纯化
在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达并纯化大肠杆菌K5中合成肝素前体的关键酶KfiA,为生物酶法合成肝素提供参考.提取大肠杆菌K5的基因组DNA,用PCR方法扩增目的基因,并将其克隆到表达载体pET-21b中,使用限制性内切酶BamHⅠ和Xho Ⅰ酶切鉴定并进行DNA测序;将该重组表达载体与分子伴侣pGro7共转化大肠杆菌BL21(DE3),用L-阿拉伯糖和IPTG诱导表达,并对不同表达条件下的产物进行SDS-PAGE分析,优化表达条件;采用HisTrap FF琼脂糖凝胶柱对目的蛋白进行亲和纯化,并通过蛋白印迹法鉴定目的蛋白.结果:克隆出KfiA目的基因,构建了融合表达质粒pET-21 b/KfiA; SDS-PAGE检测表明获得了目的蛋白,用HisTrap FF琼脂糖凝胶柱纯化并通过蛋白印迹法确定得到纯度较高的蛋白.为进一步研究生物酶法合成肝素打下基础.
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合成生物学技术在糖胺聚糖生产中的应用
糖胺聚糖是一类直链酸性多糖,具有优良的生物相容性和生理活性,被广泛应用于临床治疗,并用作药物运输载体,其中透明质酸、肝素和硫酸软骨素的相关研究为深入.由于传统方式(如动物组织提取法等)制备糖胺聚糖,存在外毒素、病毒等致病因子污染的风险,因而,利用合成生物学技术,构建重组工程菌株生产糖胺聚糖,逐渐受到研究者们的重视.主要围绕透明质酸、肝素前体及软骨素,综述糖胺聚糖的生物合成途径,并探讨产糖胺聚糖基因工程菌的构建以及糖胺聚糖生物合成过程中分子质量调控机制,以期为构建产高品质糖胺聚糖工程菌株提供新思路.
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肝素原应用研究进展
肝素原（heparosan）是某些细菌荚膜中多糖骨架的二糖重复单位，同时也是肝素和硫酸乙酰肝素的生物合成前体。以发酵获得的肝素原为前体骨架多糖，采用化学或生物修饰生产肝素及其类似物是目前非动物来源肝素生产的研究热点。近来发现，肝素原还可作为良好的药物载体，具有调节肠道菌群等作用。本文对其应用研究作一综述。
