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同时定量检测水胺硫磷和水胺氧磷的液相色谱-串联质谱法及应用
目的 建立同时测定大鼠全血中水胺硫磷及其活性代谢产物水胺氧磷的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析方法,用于毒代动力学研究中血药浓度的测定.方法 采集大鼠全血样品后即刻用4倍体积冰冷乙腈沉淀蛋白.待测物用Zorbax SB C18柱(2.1 mm×50 mm,1.8 μm)分离,以含有0.1％甲酸的水和甲醇为流动相系统进行梯度洗脱.采用ESI源正离子多反应监测模式分析,水胺硫磷、水胺氧磷和内标三唑磷的定量离子对分别为m/z 231→121、274→215和314→162.结果 水胺硫磷和水胺氧磷在5μg/L～5 mg/L浓度范围内线性良好,低定量限为5μg/L,回收率在63.1％～77.8％的范围内,准确度和精密度符合生物样品的检测要求.大鼠静脉注射3mg/kg水胺硫磷后,水胺硫磷在血中很快下降,消除半衰期为22.2 min.活性代谢产物水胺氧磷的生成也较快,10～15 min达到(257.91±42.00) ng/ml的平均峰值,消除半衰期为17.6 min.水胺硫磷和水胺氧磷的AUC0-1分别为(528.62±49.15)和(191.11+33.23)h·μg/L.结论 本研究首次建立了同时定量测定大鼠全血中水胺硫磷和水胺氧磷的LC-MS/MS分析方法,方法的专属性好、灵敏度高,适用于水胺硫磷及水胺氧磷在大鼠体内的毒物代谢动力学研究.
关键词： 水胺硫磷 水胺氧磷 液相色谱-串联质谱法 毒物代谢动力学 -
水胺硫磷在大鼠肝微粒体的生物转化和代谢动力学
目的 探讨水胺硫磷在大鼠肝微粒体的体外代谢活化产物及代谢动力学特征.方法 应用液相色谱-四级杆-飞行时间质谱( LC/QTOF MS)筛查并鉴定水胺硫磷在大鼠肝微粒体孵育液中的氧化产物.用乙酰胆碱酯酶抑制法考察水胺硫磷及其氧化产物水胺氧磷的抑酶活性.应用液相色谱-三重四级杆串联质谱( LC/Triple-Q MS/MS)定量检测肝微粒体中的水胺硫磷及其代谢产物水胺氧磷,研究水胺硫磷及其产物的消长动力学和氧化产物生成的酶动力学.结果 筛查并鉴定了水胺硫磷在大鼠肝微粒体的氧化脱硫产物水胺氧磷.水胺氧磷对乙酰胆碱酯酶的抑制活性远高于水胺硫磷,IC50值比水胺硫磷低4个数量级,表明水胺硫磷的氧化脱硫反应是一个代谢活化过程.水胺硫磷在大鼠肝微粒体中的半衰期(t1/2)为14.6 min,外推得到体内肝清除率ClH为43.8 ml·min -1·kg-1.水胺氧磷的生成符合双相酶动力学模型,Km,appl为1.12 μmol·L-1,产物生产大速率(Vmax1)为0.43 μmol· min-1·g-1；蛋白Km,app2为67.92 μmol·L-1,Vmax2为1.28 μmol·min-1·g-1蛋白.结论 水胺硫磷在大鼠肝微粒体中能快速代谢消除,生成抑酶活性更高的产物水胺氧磷而产生毒性.
