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固定化金属螯合亲和层析(IMAC)文献资料
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重组肉毒毒素E(BoNT/E)重链C端的表达、纯化及其抗原性分析
目的:克隆、表达并纯化肉毒毒素E重链C端(BoNT/EHC2)保护性抗原片段,为BoNT/E的抗体制备和检测方法的建立奠定基础.方法:采用PCR扩增BoNT/EHC2基因,插入表达载体pET28a,转化E.coli BL21(DE3)pLysS获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化.利用Western印迹和间接ELISA方法鉴定rBoNT/EHC2的抗原性.结果:表达工程菌pET28a-EHC2/BL21(DE3)pLysS于37℃用0.2 mmol/L IPTG诱导6 h,表达的目的蛋白可以达到全菌蛋白的37.9%.经过固定化金属螯合亲和层析一步纯化,rBoNT/EHC2的纯度可达95%以上.Western印迹和间接ELISA显示其具有良好的抗原性.结论:首次克隆、表达并纯化了BoNT/EHC2片段,并可被抗天然BoNT/E马血清所识别,为制备相应的抗体及建立快速检测方法做好了准备.
关键词： 肉毒毒素E 克隆 表达 固定化金属螯合亲和层析(IMAC) 抗原性
