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阿帕替尼抑制白血病细胞株Nalm6增殖及诱导凋亡的实验研究
目的 阿帕替尼(Apatinib)为新一代小分子血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2)酪氨酸激酶抑制剂,对多种实体肿瘤细胞有杀伤作用.本研究探讨Apatinib对急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)细胞株Nalm6增殖抑制及诱导凋亡的作用.方法 CCK8法检测不同浓度Apatinib对Nalm6细胞的增殖抑制作用,Annexin V/PI法检测不同浓度Apatinib诱导Nalm6细胞的凋亡情况,蛋白质印迹法法检测Apatinib处理后Bcl-2、Bcl-xL和PARP蛋白的表达变化.结果 CCK-8细胞毒性实验结果显示,Apatinib对Nalm6细胞具有明显的增殖抑制作用,呈剂量及时间依赖性,作用48 h后,2.5、5、10、20和40 μmol/L的Apatinib对Nalm6细胞的增殖抑制率分别为(3.78±1.01)％、(13.36±1.42)％、(25.80±2.83)％、(44.40±7.74)％和(64.07±6.66)％,经多个独立样本非参数检验Kruskal-Wallis H分析,各浓度的Apatinib均能诱导Nalm6细胞凋亡,与对照组(3.61±0.91)％比较差异有统计学意义,x2[13.500,P=0.009;作用72 h后,2.5、5、10、20和40 μmol/L的Apatinib对Nalm6细胞的增殖抑制率分别为(4.57+2.38)％、(20.26+4.06)％、(39.27±1.57)％、(65.19±4.45)％和(85.54±3.37)％,经检验各浓度的Apatinib均能抑制Nalm6细胞增殖,与对照组比较差异有统计学意义,x2=13.500,P=0.009.48和72 h的IC50分别为(24.39±0.05)和(13.18±0.08) μmol/L.凋亡实验显示,Apatinib能增加Nalm6细胞凋亡率,并呈剂量依赖性,作用48 h后,对照组和10、20、30、40 μmol/L Apatinib组对Nalm6细胞的凋亡率分别为(3.61±0.91)％、(5.28±1.29)％、(5.9±0.85)％、(10.18±1.48)％和(15.23±3.69)％,经检验各浓度的Apatinib均能诱导Nalm6细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义,x2=12.433,P=0.014;作用72 h后,对照组和10、20、30、40 μmol/L Apatinib组对Nalm6细胞的凋亡率分别为(3.8±1.10)％、(5.33±2.08)％、(10.10±2.86)％、(12.15±1.43)％和(25.61±3.63)％,经检验各浓度的Apatinib均能诱导Nalm6细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义,x2 =12.233,P=0.016.蛋白质印迹法结果显示,Apatinib作用Nalm6细胞24、48 h后均能下调Bcl-2和Bcl-xl的表达,切割PARP蛋白.结论 Apatinib能抑制Nalm6细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与下调Bcl-2和Bcl-xl有关.
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Apatinib对急性髓系白血病干祖细胞样细胞株kg1α的杀伤作用及其分子机制
目的 研究新型小分子酪氨酸激酶抑制剂Apatinib对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)干祖细胞增殖和凋亡的影响及其相关分子机制.方法 CCK8法检测不同浓度Apatinib对kg1α细胞的增殖抑制作用,Annexin V/PI法检测不同浓度Apatinib诱导kg1α细胞和原代CD34+AML干细胞的凋亡情况,Westem blot法检测Apatinib处理kglα细胞后PI3K/AKT通路相关蛋白(AKT、Raf和PTEN)的表达变化.结果 不同浓度的Apatinib(2.5,5,10,20,40 μmol·L-1)作用48 h和72 h后对kglα细胞均具有显著的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性,与对照组相比差异均具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01). Annexin V/PI检测细胞凋亡的结果显示,不同浓度apatinib对kg1α具有显著的诱导凋亡作用,作用48 h和72 h后的凋亡率和对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.01).不同浓度Apatinib作用48 h后对7例原代AML千细胞均具有显著的杀伤作用,与对照组相比差异具有显著的统计学意义(P＜0.01);Western blot结果显示,Apatinib处理kg1α细胞48 h后AKT/p-AKT、p-Raf表达降低,而p-PTEN表达增加.结论 Apatinib可抑制AML干祖细胞样细胞kg1α细胞的增殖,且可诱导kg1α细胞和原代CD34+AML干祖细胞的凋亡,均呈浓度和时间依赖性,其作用机制可能是通过干扰PI3K/AKT通路实现的.
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Apatinib对卵巢癌细胞A2780增殖及紫杉醇敏感性的影响
目的:研究阿帕替尼(apatinib)对卵巢癌细胞A2780增殖及紫杉醇敏感性的影响,并探讨其相关机制.方法:CCK-8法检测apatinib对A2780细胞增殖的影响,克隆形成实验检测apatinib对A2780细胞增殖能力的作用,流式细胞术检测apatinib对A2780细胞凋亡和细胞周期分布的影响,Western blot法检测apatinib靶蛋白.结果:与对照组比较,apatinib明显抑制卵巢癌A2780细胞的增殖及克隆形成(P<0.01).Apatinib作用24h后,A2780细胞凋亡率明显增加(P<0.01),呈浓度依赖性的细胞周期阻滞.Apatinib诱导A2780细胞中CDK2表达下降和p21表达上升.小剂量apatinib显著提高A2780细胞对紫杉醇的敏感性.结论:Apatinib可显著抑制卵巢癌细胞的增殖并增强其对紫杉醇的敏感性.
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小分子酪氨酸激酶抑制剂Apatinib对白血病HL-60细胞株抑制增殖作用及机制
目的 探讨新型小分子酪氨酸激酶抑制剂apatinib体外对白血病HL-60细胞增殖的影响及机制.方法 分别采用MTT法、流式细胞仪检测apatinib对白血病HL-60细胞株的细胞毒IC50值、细胞周期、凋亡的影响,Western Blot法观察apatinib对白血病细胞Erk1/2和Akt磷酸化的影响.结果 Apatinib对白血病细胞株HL-60增殖有明显抑制作用,IC50值为4.96±0.32 μmol/L;apatinib能增加HL-60细胞凋亡率,并呈浓度依赖性;与对照组相比,经不同浓度apatinib处理的HL-60细胞,其细胞周期分布无明显改变(P>0.05);Western Blot结果显示,经apatinib处理48 h后的HL-60细胞,其P-Erk1/2及P-Akt蛋白表达降低.结论 apatinib可通过下调P-Erk1/2及P-Akt蛋白表达诱导HL-60细胞凋亡,抑制其增殖.
