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糖原贮积症Ⅲa型一家系的AGL基因分析及新突变的致病性鉴定
目的 揭示一疑似糖原贮积症(GSD)Ⅲ型家系发病的分子遗传学机制,并对其致病的AGL基因的新突变做致病性鉴定.方法 先证者于2012年初在福建医科大学附属二院诊断为疑似GSD患者,并转诊至中山大学中山医学院医学遗传学教研室.首先对先证者的AGL基因的所有编码区及各编码区与内含子交界部位的序列进行直接测序.在检出突变后,再对其父母的相应位点进行检测并确认患儿突变的来源.对所发现的杂合新突变再通过克隆测序予以确证,并对新突变的致病性进行一系列鉴定,包括对100名健康对照(近2年来人群中随机取样获得)进行变性高效液相色谱(DHPLC)筛检以统计突变的频率；在11个跨物种间对突变所在氨基酸序列的保守性进行分析；比对并分析突变蛋白和正常蛋白的高级结构的差异程度.结果 先证者为“c.100C＞ T(p.R34X)”无义突变和“c.1176_1178 del TCA(p.392delHis)”缺失突变的复合杂合子.其中,p.R34X国外已报道为致病性突变,而c.1176_1178 del TCA为新发现的缺失突变.其父为p.R34X无义突变的携带者；其母为c.1176_1178 del TCA缺失突变的携带者.dbSNP数据库、HGMD数据库及近几年新文献的检索确认c.1176_1178 delTCA为一新突变,并排除多态性变异的可能.11个跨物种的保守性分析结果表明:该突变位点所在氨基酸在进化上具有高度保守性.突变蛋白和正常蛋白预测的高级结构的比对结果显示:此缺失突变造成了AGL蛋白空间立体构象的显著改变.结论 所发现的c.1176_1178 del TCA(p.392delHis)缺失突变是一新的致病性突变,它和“c.100C＞ T(p.R34X)”无义突变是先证者患GSDⅢa病的根本原因,这两种突变分别是由母亲和父亲各遗传一个而来.
关键词： 糖原贮积症Ⅲa型(GSDⅢa) AGL基因 新突变 致病性鉴定 -
Maroteaux-Lamy综合征的ARSB基因分析及新突变的 致病性鉴定
[目的]对7家拟诊为Maroteaux_Lamy综合征(MPSⅥ)的患儿及其父母进行ARSB基因的突变检测和新突变的致病性鉴定,以揭示其分子发病机制,为将来的产前/植入前基因诊断等创造前提条件.[方法]在临床初诊及GAG尿检和MPS酶检的基础上,抽取患儿及其父母EDTA抗凝血,进行ARSB基因的PCR扩增和Sanger测序.对所发现的新突变,在经HGMD、1000G和ExAC等数据库核实排查后,首先用SWISS-MODEL软件分析、比对突变蛋白和正常蛋白的空间构象,然后用Clustal X软件分析跨物种氨基酸的保守性,用PROVEAN、SIFT、PolyPhen-2软件预测新突变的致病性,后用ACMG标准对新突变的致病性进行综合分析鉴定.[结果]1)7个家系先证者的基因检测结果分别为:No1:c.574T>C,p.C192R纯合错义突变;No2:c.160G>A/p.D54N(来自其母)和c.1197C>G/p.F399L(来自其父)的复合杂合子;No3:仅检出c.1072G>A/p.V358M和IVS5 as(-27)A>C变异,但酶检和临床表型符合VI型;No4:为c.281C>T,p.S94L(新突变,来自其母)和IVS5 as(-27)A>C(来自其父)的复合杂合子;No5:为c.1197 C>G,p.F399L纯合错义突变;No6:为c.1197 C>G,p.F399L(来自其母)和c.1379 C>T,p.S460F(新突变,来自其父)的复合杂合子;No7:为c.499 G>A,p.G167R(来自其父)和c.1325C>T,p.T442M(来自其母)的复合杂合子.2)新突变鉴定结果:对正常ARSB酶蛋白和p.S94L突变酶蛋白的空间构象的预测比对结果显示,两者有明显区别;跨物种保守性分析结果显示,p.94突变点所在氨基酸(S)在物种进化过程中具有高度保守性;PROVEAN、SIFT和PolyPhen-2软件对p.S94L预测结果分别为:Deleterious、Damaging和Probably damaging.用上述方法对p.S460F的预测结果及ACMG的综合分析结果也显示该突变可能是致病性的.[结论]1)家系4的p.S94L和家系6的p.S460F新突变可能都是新的致病性突变,有可能都是引起患儿发病的内在原因之一.2)家系1,2,5,6,7可以确诊为MPS VI型,其基因型和表现型具有显著的相关性,家系3虽经酶检确诊,临床症状和尿检结果也都与MPS VI型符合,但却未能在DNA水平查到明确的突变类型,其表现型与基因型的相关性还有待进一步证实.
关键词： Maroteaux_Lamy综合征 ARSB基因 新突变 致病性鉴定
