首页 > 文献资料
-
胃癌GST-π, P-gp, Top-Ⅱ和nm23 H1表达的意义
目的探讨GST-π的表达变化与胃癌生物学行为、P-gp,Top-Ⅱ和nm23H1表达的相关性方法应用免疫组织化学(IHC)-催化信号放大(CSA)系统法检测66例胃癌组织GST-π、P-糖蛋白、Top-Ⅱ和nm23H1的表达.结果其GST-π、P-糖蛋白、Top-Ⅱ和nm23H1的阳性检测率分别为82%,77%,50%和58%.GST-π和Top-Ⅱ表达与胃癌组织学类型密切相关(χ2=6.45和χ2=5,P＜0.05);GST-π和nm23H1表达与淋巴结转移密切相关,GST-π呈正相关(χ2=10.048,P＜0.01),nm23H1呈负相关(χ2=24.78,P＜0.001);GST-π和P-gp高表达与＜3a生存期相关(χ2=9.506,P＜0.01和χ2=8.439,P＜0.01),nm23H1高表达与≥3 a生存期相关(χ2=10.89,P＜0.01).结论 GST-π与P-糖蛋白、Top-Ⅱ一样可作为肿瘤耐药的标志物,还可作为肿瘤分化程度,淋巴结转移和患者预后差的标志物.
-
人谷胱甘肽硫转移酶的克隆表达及活性鉴定
目的：克隆表达人谷胱甘肽硫转移酶GSTA1、GSTT1和GSTP1，用于研究化合物的代谢途径。方法：采用反转录PCR得到人谷胱甘肽硫转移酶GSTA1、GSTT1和GSTP1基因全长cDNA。将测序正确的cDNA连接到pET-28 a阳性表达载体上并在大肠杆菌BL21（ DE3）中稳定表达。利用亲和色谱纯化表达得到重组酶，以2，4-二硝基氯苯为底物，测定340 nm波长处吸收度的变化，检测酶活性。结果：PCR产物与克隆载体pMD19-T连接后的质粒测序结果表明，目的基因的cDNA序列完全正确。表达质粒在大肠杆菌BL21（ DE3）中获得良好的可溶性表达，经镍离子亲和柱纯化后目的蛋白较纯，具有较好的催化活性。所表达的 hGSTA1、hGSTT1和hGSTP1酶比活性分别为17．55、0．02、18．75μmol· min-1· mg-1蛋白。结论：成功构建了人谷胱甘肽硫转移酶GSTA1、GSTT1和GSTP1的原核表达系统，得到的重组酶可用于药物代谢研究。
