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细胞毒素坏死因子文献资料
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大肠杆菌0157:H7细胞毒素坏死因子同源基因的克隆表达
目的 克隆表达肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)0157∶H7与细胞毒素坏死因子(cytotoxic necrotizing factor,CNF)相关的050岛Z1824基因.方法 设计引物采用PCR法自EHEC 0157∶H7基因组扩增Z1824,构建原核表达质粒pET-30a(+)-Z1824,经测序鉴定后转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测.结果 PCR法自EHEC 0157∶H7基因组扩增出约2833 bp的目的 片段;原核表达质粒pET-30a(+)-Z1824经PCR及测序鉴定与预期序列一致.转化E.coli BL21(DE3)后IPTG诱导目的 蛋白表达,SDS-PAGE初步测定目的 蛋白的相对分子质量在120×103附近,结果证明以当IPTG浓度为0.9 mM,诱导时间为4 h,重组基因表达量高.破菌后电泳证实目的 蛋白均以包涵体形式表达.结论 EHEC 0157∶H7050岛与CNF具有一定同源性的Z1824基因片段经基因克隆后获得了较高的表达量,为进一步的生物学性质及免疫学特性研究奠定了基础.
关键词： 肠出血性大肠杆菌O157:H7 细胞毒素坏死因子 基因克隆 原核表达
