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修饰CⅡTA基因抑制异种器官移植中供体猪SLA的表达
目的构建可抑制猪MHC(SLA)Ⅱ类分子表达的MHCⅡ类分子反式激活因子(CⅡTA)突变体,抑制人CD4+ T细胞对猪细胞株的免疫应答,为异种器官的应用研究奠定基础. 方法用PCR、人工合成寡核苷酸、限制性内切酶等技术构建不含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA2、含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA3突变体.用脂质体转染法将上述2种突变体及pcDNA3空载体转入猪细胞株PIEC细胞和L23细胞.用流式细胞术和RT-PCR法观察它们对PIEC/L23细胞SLA-DR/DQ分子的诱导性和组成性表达的影响.通过混合淋巴细胞反应观察人CD4+ T细胞对转入突变体及空载体后的猪细胞的免疫应答强度的变化. 结果在细胞和分子水平证实pcDNA3mCⅡTA3对PIEC/L23细胞SLA-DR/DQ的表达起明显抑制作用,而pcDNA3mCⅡTA2和pcDNA3空载体无此作用.SLAⅡ类分子受抑制的猪细胞已基本丧失了对人CD4+ T细胞的刺激能力. 结论转染能抑制SLAⅡ类分子表达的突变体使PIEC细胞丧失了对人CD4+ T细胞的刺激能力,为异种器官的修饰提供了新的思路.
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转染Ⅱ类分子反式激活因子基因突变体抑制猪SLA的表达
为观察CIITA基因突变体对猪SLA表达的影响,用脂质体转染法将pcDNA3及CIITA突变体pcDNA3mCIITA2、pcDNA3mCIITA3和pcDNA3mCIITA4转染人猪血管内皮细胞系PIEC和猪B淋巴细胞系L23.利用流式细胞术/RT-PCR检测各种突变体对猪SLA-DR、-DQ分子/mRNA组成性和诱导性表达的影响.发现两种突变体pcDNA3mCIITA3和pcDNA3mCIITA4对PIEC/L23细胞SLA Ⅱ类分子的表达起明显的抑制作用,而空载体pcDNA3和不具有起始密码子的突变体pcDNA3mCIITA2无此作用.提示pcDNA3mCIITA3和pcDNA3mCIITA4能抑制猪SLA Ⅱ类分子的表达.
