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幽门螺杆菌napA基因原核表达系统构建及其表达产物的免疫性和致炎作用
目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)napA基因的原核表达系统,了解表达产物rNAPA免疫性和致炎作用. 方法采用PCR从Hp临床菌株Y06株DNA中扩增napA全长基因片段,T-A克隆后测序,构建napA基因原核表达系统pET32a-napA-E.coli BL21DE3.采用SDS-PAGE估计不同浓度IPTG诱导下rNAPA表达产量,Ni-NTA亲和层析收集rNAPA.采用Western blot和免疫扩散试验鉴定rNAPA的免疫性.采用ELISA分别检测109株Hp临床菌株NAP(neutrophil-activating protein)表达、125例Hp感染者血清中NAP抗体和rNAPA诱导人脐静脉内皮EVC-304细胞分泌IL-1、IL-8、TNF-α和ICAM-1的作用. 结果所克隆的napA基因与报道的相应核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94.8%和96.9%.所构建的napA基因原核表达系统rNAPA表达量高达细菌总蛋白的50%以上.Hp全菌抗体商品(DAKO)能识别rNAPA并与之结合,rNAPA兔抗血清的免疫扩散试验效价为1∶8.95.4% Hp临床菌株(104/109)表达NAP,92.8% Hp感染者(116/125)血清中存在rNAPA抗体.1～10 μg的rNAPA均可诱导人脐静脉内皮细胞株EVC-304 IL-1、IL-8、TNF-α和ICAM-1的分泌明显增加(P<0.05～0.01). 结论成功地从Hp临床菌株Y06中构建了napA基因高效原核表达系统,rNAPA有良好的免疫反应性及抗原性,NAP和NAP抗体广泛存在于国内Hp菌株和Hp感染者血清中,rNAPA对EVC-304细胞有直接的致炎作用.
关键词： 幽门螺杆菌napA基因 克隆/表达 抗原抗体分布 免疫性/致炎作用
