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套式PCR应用于恙虫病东方体媒介、鼠类血块及脾脏标本的实验检测研究
目的:检测恙螨幼虫体内及鼠类标本中恙虫病东方体携带情况,预测流行趋势,评价套式PCR反应的敏感性和特异性,以进一步开展分子流行病学研究.方法:参照文献中恙虫病东方体Karp株Sta 58群特异性抗原基因序列,合成两对DNA引物;应用套式PCR检测现场鼠体表恙螨幼虫体内及鼠类标本的恙虫病东方体DNA;PCR扩增产物通2%琼脂糖凝胶电泳分析和12% PAGE电泳分析,并用PGEM-3Zf(+)/HaeⅢ DNA作为核酸分子量参照物,证实扩增产物是恙虫病东方体Sta 58kDa群特异性抗原基因88bp片段.结果:从送检的29份鼠血块和112份脾组织中均检出阳性1份;从39份恙螨幼虫体内检出阳性8份.实验感染小鼠后3d,其血块及脾组织均未检出恙虫病东方体;而在感染后6和9d,能从血块及脾组织中检出恙虫病东方体.结论:套式PCR具有很高的敏感性和特异性,是疫源地及现场流行病学调查的有效手段.
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套式PCR应用于恙虫病鼠类标本的检测研究
目的评价基因扩增法应用于检测鼠类标本调查恙虫病疫源地的作用。方法用一定量恙虫病东方体人工感染昆明种小鼠，攻击后第3、6、9天处死小鼠取血块及脾脏用特异性套式PCR技术进行恙虫病东方体DNA的检测，再用该技术测定现场采集的鼠类标本，以可从标本中扩增出一段长88bp的DNA片段作为实验或现场捕获鼠感染了恙虫病东方体的指标，继而估计该地区是否存在恙虫病疫源地。结果实验感染恙虫病东方体3天时在两类标本中均不能检出该病原DNA，而第6天测定时均可发现含有恙虫病东方体；从福建闽西北地区采集的111份鼠类脾脏中检出1份阳性标本，另从江西送检的29份野鼠血块中也检出1份阳性标本，说明采集标本区域已成为恙虫病疫源地。结论套式PCR扩增技术具有很好的特异性和敏感性，可用于现场鼠类标本的恙虫病病原学的调查。
