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锰超氧化物岐化酶(AdMn-SOD)基因文献资料
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十二指肠钩虫锰超氧化物岐化酶基因的克隆与表达
目的 克隆十二指肠钩虫锰超氧化物岐化酶(AdMn-SOD)基因,并在大肠埃希菌中表达. 方法 用3'RACE及RT-PCR技术扩增获得AdMn-SOD全长cDNA编码序列;设计引物,克隆AdMn-SOD成熟肽编码序列,连接到原核表达载体pET32a,构建重组表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)并用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达情况,诱导表达的重组蛋白用Ni亲和层析进行纯化. 结果 成功克隆获得AdMn-SOD全长cDNA序列,推导编码的氨基酸序列具有Mn-SOD的保守结构特征;构建了pET32a/AdMn-SOD原核表达重组质粒,AdMn-SOD在大肠埃希菌中得到高效表达,表达的融合蛋白的分子质量单位约为40 ku. 结论 成功克隆并表达了十二指肠钩虫锰超氧化物岐化酶基因,为进一步了解十二指肠钩虫锰超氧化物岐化酶的特性与功能奠定了基础.
关键词： 十二指肠钩虫 锰超氧化物岐化酶(AdMn-SOD)基因 克隆 表达
