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间日疟原虫中国湖北分离株传播阻断疫苗候选抗原Pvs 28的基因多态性分析
从间日疟原虫感染患者血样制备的干滤纸片中提取寄生虫基因组DNA,以实验室Sall株的Pvs28基因序列设计合成特异性引物,以各分离株基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs28基因全长,其大小为696Bp的片段,将PCR产物直接测序.所获得的序列用Mac Vector软件分析并以Sall株为标准进行突变比较.结果表明,该Pvs28基因在核苷酸水平共存在两种突变形式,即3个点突变与5～7个不同数目的重复片段.点突变情况与我们以前的研究相同,但重复片段数目5和7与以前报道有差异.本文是对我国间日疟原虫单纯流行区湖北省疟原虫分离株传播阻断疫苗候选抗原Pvs28基因多态性的首次报导,研究结果为我国间日疟原虫传播阻断疫苗的实际开发与应用提供了必需的前提依据.
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间日疟传播阻断疫苗Pvs25和Pvs28重组蛋白免疫活性的实验观察
目的 观察间日疟传播阻断疫苗候选抗原Pvs25和Pvs28重组蛋白免疫小鼠后抗体产生情况,从而探讨此两种候选抗原的免疫活性.方法 用酵母菌表达的Pvs25和Pvs28重组蛋白皮下免疫DBA/2小鼠;采用ELISA方法,分别对各组小鼠免疫前后不同时间点血清中特异性IgG及其亚类IgG1、IgG2a的水平进行动态检测.结果 初次免疫后第28d IgG及其亚类IgG1、IgG2a均出现有意义的升高(P＜0.01),至第112d IgG及其亚类IgG1一直持续于较高的水平(P＜0.01);而IgG2a水平则于初次免疫后第42d开始下降,但至112d仍高于免疫前及对照组(P＜0.05).结论 Pvs25和Pvs28重组蛋白免疫DBA/2小鼠后可产生较高水平的特异性IgG抗体,并以IgG1亚类为主.
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间日疟原虫重组蛋白Pvs25和Pvs28免疫小鼠应答机制观察
目的 观察间日疟传播阻断疫苗候选抗原Pvs25和Pvs28的免疫应答机制.方法 分别用与弗氏佐剂乳化后的Pvs25和Pvs28重组蛋白皮下免疫DBA/2小鼠;采用ELISA分别对各组小鼠脾细胞培养上清的IFN-γ、IL-4、IL-10动态检测;以ELISPOT方法检测小鼠脾脏IFN-γ+和IL-4+细胞数量.结果 经重组蛋白免疫的两组小鼠脾细胞培养上清IFN-γ的含量于初次免疫后第14d升高,与对照组相比差异显著(P＜0.01),但随后降至对照组水平;IL-4和IL-10均在初次免疫后第28d出现有意义的升高(P＜0.01),后升高更为明显,分别直至免疫后期70d、56d出现下降,但直至112d仍明显高于免疫前的水平(P＜0.01).初次免疫后第70d、98d小鼠脾脏IFN-γ+和IL-4+细胞数量,与对照组相比IFN-γ+无明显变化,而IL-4+则明显增多(P＜0.01).结论 Pvs25和Pvs28重组蛋白可诱导小鼠产生以Th2反应为主的免疫应答.
