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扩展莫尼茨绦虫基因芯片的制作及分析
通过EST计划获得1 080个基因片段,制备了扩展莫尼茨绦虫cDNA芯片.该芯片一个域有52行、78列,密度为863点/cm2,其中包含1 080个靶基因、9个阳性对照、16个阴性对照、8个空白对照,每个基因做3个重复.用扩展莫尼茨绦虫的成节与头颈节总RNA与芯片进行杂交,获得了成节与头颈节基因表达谱,芯片结果分析差异系数为0.1807,共找到91个在扩展莫尼茨绦虫成节高表达基因,幼节高表达基因81个,其他的基因表达差异不大.通过同源性比对分析,成节高表达基因主要有钙调节蛋白、外致密纤维精子尾、富含半胱氨酸蛋白前体和卵黄蛋白原等;头颈节高表达基因主要有果糖-二磷酸盐醛缩酶、皮层细胞蛋白和胶原等.该芯片可以进一步应用于扩展莫尼茨绦虫基因组等方面的研究,对基因表达差异进行高通量检测.
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10个生殖发育相关基因在扩展莫尼茨绦虫不同发育节片的mRNA转录水平分析
根据扩展莫尼茨绦虫转录组测序结果,选取在虫体不同发育节片(即头颈节、幼节、成节和孕节)差异表达的10个基因KIFC1、Kif17、SmadD、β转录生长因子、β转录生长因子受体、HSD5、嘌啉毒素胺基肽酶、甲硫氨酸胺基肽酶2, 以及转录因子fork和Sox,利用实时定量PCR技术验证上述基因在扩展莫尼茨绦虫各发育阶段节片中mRNA转录情况.结果表明,与靶标基因在虫体头颈节的转录水平相比,KIFC1,Kif17基因在幼节的表达呈明显的上调趋势(P＜0.01).KIFC1、Kif17、β转录生长因子受体和嘌啉毒素胺基肽酶基因在成节的表达呈上调趋势(P＜0.01).HSD5、β转录生长因子受体和甲硫氨酸胺基肽酶2基因在孕节的表达呈上调趋势(P＜0.01).
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扩展莫尼茨绦虫不同体节翻译延伸因子和引发酶mRNA转录水平研究
本研究以β微管蛋白基因作为内参基因,采用实时荧光定量PCR方法检测该基因在扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)4个不同发育阶段,即头节、幼节、成节和孕节中的表达差异.标准曲线分析显示,翻译延伸因子、引发酶基因和β微管蛋白基因标准质粒实时定量扩增Ct值与标准质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数(R2)均大于0.99.同时实验结果显示,翻译延伸因子和引发酶基因在虫体各发育阶段中的转录水平存在差异.其中,翻译延伸因子和引发酶基因在扩展莫尼茨绦虫头节和幼节的转录水平均较高,提示这2个基因可能在头节和幼节的发育中有重要作用.
