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1999-2008年广东省韶关市H3亚型流行性感冒病毒的变迁
目的 通过A型流行性感冒(流感)病毒H3亚型血凝素HA1基因的变异,探讨韶关市1999-2008年H3亚型流感病毒的变迁.方法 复苏韶关市疾病预防控制中心保存的历年H3亚型流感毒株,提取病毒RNA,RT-PCR扩增病毒HA1基因,纯化产物进行核苷酸序列测定,使用DNA Start MegAlign等生物软件包对序列进行分析.结果研究测定了4个年份的流感毒株,与代表株A/Panama/2007/1999相比,同源性为91.3%～93.8%,在5个抗原决定簇共14个氨基酸发生变异,RBS上有6个位点发生变异,各毒株均在不同的位点上增加了一个糖基化位点;与代表株A/Flujian/411/2002比较,同源性为90.2%～97.7%,18个氨基酸变异发生在5个抗原决定簇,10个氨基酸变异发生在RBS,A/SG/199/1999,A/SG/y009/2008分别增加了一个糖基化位点;与代表株A/Wisconsin/67/2005比较,同源性从88.3%～98.4%,共有14个氨基酸变异发生在5个抗原决定簇,RBS上有9个氨基酸发生变异,各毒株均在不同的位点上增加了一个糖基化位点;本次研究的毒株变异率逐渐下降,变异活跃的两个氨基酸第158和173位点分别位于B和D抗原决定簇.结论 韶关市H3亚型流感病毒在1999-2008年间发牛了3次抗原性变异,每一次变异大约间隔3～4年.从2008年的氨基酸变异情况得知,H3亚型流感病毒的抗原性漂移有增强的趋势.
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H3亚型流感重组腺病毒候选疫苗的构建及鉴定
目的 研制一种制备工艺简单、无需鸡胚即可大量生产的预防季节性H3亚型流感重组腺病毒候选疫苗.方法 构建含有外源H3HA基因的重组腺病毒穿梭载体质粒pacAd5 H3HA,并用酶切的方法进行鉴定;将鉴定阳性的pacAd5-H3HA与腺病毒骨架载体质粒线性化后用脂质体介导共转染HEK293细胞,分别采用RT-PCR、间接免疫荧光试验以及Western blot方法对构建的H3亚型流感重组腺病毒疫苗进行鉴定. 结果 RT-PCR扩增出约1.8 kb片段,与目的片段大小相同,表明外源基因H3HA成功插入重组腺病毒.间接免疫荧光试验显示重组腺病毒转染后的HEK293细胞中检测到特异性蛋白,Western blot显示在70 ku处有一反应条带,表明该H3HA蛋白能被兔抗H3亚型HA蛋白血清识别. 结论 构建的H3亚型流感重组腺病毒能在HEK293细胞中表达具有反应原性的H3HA蛋白,为后续的动物实验奠定了基础.
