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免疫荧光灶试验法检测消毒剂灭活病毒效果的方法研究
目的 建立一种检测消毒剂灭活病毒效果的方法.方法 采用免疫荧光灶试验方法,建立消毒剂灭活病毒效果的检测方法.结果 本研究建立的荧光灶试验法实验证明,采用浓度为2 000 mg/L季铵盐复合消毒剂对悬液内狂犬病毒作用3 min,平均灭活对数值大于4.0.实验浓度证明该消毒液对病毒宿主细胞生长有影响,但本研究选用的中和剂可有效中和高实验浓度的消毒剂对病毒及其宿主细胞的影响.结论 本研究建立的免疫荧光灶试验方法,可以用于该皮肤黏膜消毒剂灭活狂犬病毒效果的检测,操作简便,出结果快,利于统计计算,便于观察.
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RIP140重组腺病毒的构建及在乳鼠心肌细胞中的表达
目的：原代乳鼠心肌细胞为终末期的分化细胞，常规的质粒转染效率低下。受体相互作用蛋白140（receptor-in-teracting protein 140，RIP140）目的基因长达3.5kb，为研究RIP140蛋白在非增殖型的心肌细胞表达情况，需要寻找一种更好的过表达系统。方法 RIP140基因全长序列克隆入pAdTrack-CMV穿梭载体中，在BJ5183细菌中与腺病毒骨架载体pAdEasy-1进行同源重组。经酶切及测序验证的阳性重组克隆转染入AD293细胞中进行病毒的包装与扩增。采用TCID50法测定病毒滴度、CCK-8试剂盒分析腺病毒对心肌细胞活力的影响。采用Western blot鉴定RIP140蛋白在心肌细胞中的表达情况。结果测序分析结果表明RIP140的全长序列正确克隆到 AdEasyTM腺病毒系统中。Ad-RIP140、Ad-GFP 的病毒滴度分别为1011.3和1011.7 PFU · mL－1。腺病毒感染复数在200以下时，对心肌细胞活力无影响。绿色荧光及Western blot分析显示Ad-RIP140感染心肌细胞12 h，RIP140表达明显增加（P＜0.05）。结论成功构建了RIP140全长序列的腺病毒载体，并使其蛋白有效表达于心肌细胞中，这将有助于后续进行RIP140在心肌细胞中的作用的研究。
