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纯化:单克隆抗体文献资料
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小鼠OX40融合蛋白的鉴定、优化表达、纯化及单克隆抗体的制备
目的:鉴定、优化表达并纯化小鼠OX40融合蛋白,制备小鼠OX40单克隆抗体.方法:将已构建好的pET32a-OX40重组质粒DNA转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,涂于含Amp平板筛选出阳性克隆,经Western Blotting鉴定融合蛋白,对阳性克隆株通过分别改变IPTG浓度、培养温度及时间条件,获得佳表达条件,采用包涵体纯化法和SDS-PAGE电泳纯化目的蛋白,免疫BalB/C小鼠,融合、筛选杂交瘤阳性克隆,用间接ELISA及Dot-ELISA鉴定克隆化阳性细胞上清,接种小鼠腹腔体内扩增吸取腹水,经滤膜过滤、饱和硫酸胺沉淀及透析步骤纯化腹水中的抗体,用SDS-PAGE电泳分析纯化抗体.结果:转化的质粒经Western Blotting鉴定,证实有目的蛋白表达.改变诱导条件后SDS-PAGE结果表明,在IPTG浓度0.4mM,温度30℃,诱导4h后,融合蛋白的表达量高,采用包涵体纯化法和SDS-PAGE电泳获得纯化目的蛋白,免疫小鼠后成功制备小鼠OX40单克隆抗体.结论:小鼠OX40融合蛋白在BL-21细胞获得成功表达,同时获得其佳表达条件并成功纯化目的蛋白,成功制备小鼠OX40单克隆抗体.
